[發(fā)明專(zhuān)利]一種α-丁酮酸修飾的接枝聚乙烯亞胺的殼聚糖微球及其制備和應(yīng)用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711380058.3
• 申請(qǐng)日: 2017-12-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107961769B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊春燕;李博
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 河北工業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): B01J20/26
• 分類(lèi)號(hào): B01J20/26;B01J20/28;B01J20/30;C12N9/36;C12N9/88;C07K14/57;C07K1/113;C07K1/14
• 代理公司: 天津翰林知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 12210
• 代理人: 趙鳳英

1.一種α-丁酮酸修飾的接枝聚乙烯亞胺的殼聚糖微球的應(yīng)用，其特征為該微球?yàn)楸砻娼又垡蚁﹣啺返臍ぞ厶俏⑶颍–S-PEI），表面再修飾有α-丁酮酸，其中，微球上接枝的聚乙烯亞胺的量以陰離子交換容量計(jì)為918～1275 μmol/g，修飾的α-丁酮酸的量以陽(yáng)離子交換容量計(jì)為612～1860 μmol/g，微球的等電點(diǎn)值為5.5～10.0；

所述的α-丁酮酸修飾的接枝聚乙烯亞胺的殼聚糖微球的制備方法，包括以下步驟：

將CS-PEI微球置于錐形瓶中，加入濃度為0.5～5 g/L的α-丁酮酸溶液，使微球在反應(yīng)體系中的濃度為80～100 g/L，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)體系pH值為4～6，然后將體系置于空氣振蕩器中，在溫度為25～30 ℃、轉(zhuǎn)速為120～170 rpm條件下反應(yīng)6～8 h；再將微球用去離子水，在轉(zhuǎn)速為5000～8000 rpm條件下離心水洗干凈后，加入0.5～0.6 g/L NaBH₄溶液，使微球在體系中的濃度為80～100 g/L，并用HCl溶液調(diào)節(jié)體系pH值為7～8，然后將體系置于空氣振蕩器中，在溫度為25～30 ℃、轉(zhuǎn)速為120～170 rpm條件下反應(yīng)12～24 h；反應(yīng)結(jié)束后，將微球用去離子水，在轉(zhuǎn)速為5000～8000 rpm條件下離心水洗，得到α-丁酮酸修飾的接枝聚乙烯亞胺的殼聚糖微球（CS-PEI-α-丁酮酸）；

該微球用于輔助蛋白質(zhì)復(fù)性并對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行吸附提取，包括如下步驟：

1）確定待復(fù)性及吸附提取的蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)值，然后將其與下一步將要使用的復(fù)性緩沖液的pH值相比；如果蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)值大于復(fù)性緩沖液的pH值，則從所述的α-丁酮酸修飾的接枝聚乙烯亞胺的殼聚糖微球中選取等電點(diǎn)值也大于復(fù)性緩沖液的pH值的微球；如果蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)值小于復(fù)性緩沖液的pH值，則從所述的α-丁酮酸修飾的接枝聚乙烯亞胺的殼聚糖微球中選取等電點(diǎn)值也小于復(fù)性緩沖液的pH值的微球；

所述的復(fù)性緩沖液中含有1～2 mol/L 尿素、20～50 mmol/L Tris–HCl及1～3 mmol/LEDTA，溶劑為去離子水，且pH值為7.0～9.0；

2) 將CS-PEI-α-丁酮酸微球加入到復(fù)性緩沖液中，使復(fù)性體系中微球濃度為100～150g/L；上述混合物置于空氣振蕩器中，在溫度為25～30 ℃、轉(zhuǎn)速為120～170 rpm條件下振蕩預(yù)平衡直至溫度恒定；然后向其中加入待復(fù)性的濃度為10～20 g/L變性蛋白質(zhì)溶液，使復(fù)性體系中蛋白質(zhì)濃度為0.5～2 g/L；混合均勻后，置于空氣振蕩器中，在轉(zhuǎn)速為120～170rpm條件下復(fù)性3～12 h，復(fù)性溫度與此前復(fù)性緩沖液預(yù)平衡的溫度相同；

所述的變性蛋白質(zhì)溶液的制備方法為：將蛋白質(zhì)溶解于變性緩沖液中，使蛋白質(zhì)濃度為10～20 g/L，于25～40 ℃變性3～24 h；

所述的變性緩沖液中含有8 mol/L尿素、20～50 mmol/L Tris–HCl及1～3 mmol/LEDTA，溶劑為去離子水，且pH值為7.0～9.0；

3）復(fù)性完成后，用0.1～0.5 mol/L的NaOH溶液或0.1～0.5 mol/L的HCl溶液調(diào)節(jié)上述體系pH值為6.0～10.0，從而將步驟2)中的復(fù)性緩沖液變?yōu)槲骄彌_液，將體系置于空氣振蕩器中，在溫度為25～30 oC、轉(zhuǎn)速為120～170 rpm條件下吸附3～12 h。

2. 如權(quán)利要求1所述的α-丁酮酸修飾的接枝聚乙烯亞胺的殼聚糖微球的應(yīng)用，其特征為所述的α-丁酮酸修飾的接枝聚乙烯亞胺的殼聚糖微球的制備方法中，所述的NaOH溶液的濃度為0.1～0.5 mol/L，HCl溶液的濃度為0.1～0.5 mol/L。

3.如權(quán)利要求1所述的α-丁酮酸修飾的接枝聚乙烯亞胺的殼聚糖微球的應(yīng)用，其特征為所述的輔助蛋白質(zhì)復(fù)性并對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行吸附提取中，步驟3)中所述的吸附緩沖液pH值為介于步驟2)中CS-PEI-α-丁酮酸微球的等電點(diǎn)值及蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)值之間的pH值。

4.如權(quán)利要求1所述的α-丁酮酸修飾的接枝聚乙烯亞胺的殼聚糖微球的應(yīng)用，其特征為所述的輔助蛋白質(zhì)復(fù)性并對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行吸附提取中，所述的蛋白質(zhì)為溶菌酶、牛碳酸酐酶II或重組人γ-干擾素。