[發(fā)明專利]用于大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr的檢測(cè)試劑盒、檢測(cè)方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711377828.9
• 申請(qǐng)日: 2017-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN108165643A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張石磊;王春光;張鐵;呂建存;賈澤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/10;C12R1/19
• 代理公司: 石家莊國(guó)為知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 13120
• 代理人: 林艷艷

本發(fā)明涉及微生物耐藥性技術(shù)領(lǐng)域，具體公開一種用于大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr的檢測(cè)試劑盒、檢測(cè)方法及應(yīng)用。本發(fā)明設(shè)計(jì)了acr耐藥通路的4個(gè)基因的引物，并且以16S rDNA為內(nèi)參基因。使用Fast Start Universal SYBR Green Master(Roche Diagnostics GmbH,Germany)抗性基因檢測(cè)試劑盒檢測(cè)基因的表達(dá)量，使用高通量熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，兩株細(xì)菌的氟喹諾酮相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量和細(xì)菌之間的差異表達(dá)倍數(shù)可以直觀地反應(yīng)出來，更加科學(xué)和嚴(yán)謹(jǐn)，填補(bǔ)技術(shù)空白。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物耐藥性技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr的檢測(cè)試劑盒、檢測(cè)方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

acr耐藥外排系統(tǒng)與大腸桿菌抵抗藥物殺傷的主要外排泵，多藥耐藥外排泵：就是對(duì)大腸桿菌體內(nèi)的藥物有外排功能，并且不是針對(duì)性的，是大腸桿菌保護(hù)自己不被藥物殺死的一個(gè)外排系統(tǒng)，比如使用抗生素，大腸桿菌會(huì)被殺死，而大腸桿菌被殺死的原因是因?yàn)榭股卦诖竽c桿菌體內(nèi)產(chǎn)生了毒害作用，而大腸桿菌的這個(gè)耐藥外排泵可以把這些對(duì)自己有毒害作用的藥物排出去，從而變得耐藥，人如果感染了這種細(xì)菌，用抗生素的效果就不太好。目前尚無檢測(cè)大腸桿菌耐藥外排系統(tǒng)的方法，在實(shí)際用藥中，由于該系統(tǒng)活躍程度的不同，治療效果受到很大影響，不能更好的指導(dǎo)用藥。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有尚無檢測(cè)大腸桿菌耐藥外排系統(tǒng)的方法等問題，本發(fā)明提供一種用于大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr的檢測(cè)試劑盒。

進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供一種用于大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr的檢測(cè)方法。

進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供所述的用于大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr的檢測(cè)試劑盒或所述的用于大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr的檢測(cè)方法在大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr領(lǐng)域中的應(yīng)用。

為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明實(shí)施例采用了如下的技術(shù)方案：

一種用于大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr的檢測(cè)試劑盒，所述檢測(cè)試劑盒用于高通量熒光定量PCR檢測(cè)大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr，所述檢測(cè)試劑盒包括16S rDNA為內(nèi)參基因的acrF、acrR、acrE、acrS基因的引物，所述引物的序列如下：

16S的上游引物：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；

16S的下游引物：GGTTACCTTGTTACGACTT；

acrF的上游引物：GCGGCCAGGCACAAAA；

acrF的下游引物：TACGCTCTTCCCACGGTTTC；

acrR的上游引物：GCGCTGGAGACACGACAAC；

acrR的下游引物：GCCTTGCTGCGAGAACAAA；

acrE的上游引物：AAATACATCAGCCAGCAGGAG；

acrE的下游引物：GTTCAGTCGTTTGCCCATTAG；

acrS的上游引物：AAAAGAACCAAAGCCGAAGC；

acrS的下游引物：CGAAGTGCCAGTAGATAGCG。

進(jìn)一步地，本發(fā)明提供一種用于大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr的檢測(cè)方法，所述檢測(cè)方法為高通量熒光定量PCR方法，所述檢測(cè)方法至少包括以下步驟：

步驟1、從待測(cè)樣品中提取DNA樣品；

步驟2、采取上述大腸桿菌藥物流出系統(tǒng)acr的檢測(cè)試劑盒對(duì)步驟1所提取的所述DNA樣品使用高通量熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；

步驟3、對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。