[發(fā)明專(zhuān)利]一種單鏈環(huán)狀RNA和DNA及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711377042.7
• 申請(qǐng)日: 2017-12-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108251424A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊誠(chéng);孫濤;陳雙;周紅剛;孟晶
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天利康（天津）科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/113
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/113;C12N15/10;A61K48/00;A61K31/7088;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 北京德恒律治知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11409
• 代理人: 章社杲;盧軍峰

本發(fā)明提供了一種單鏈環(huán)狀RNA和DNA及其制備方法和應(yīng)用，該單鏈環(huán)狀RNA和DNA可吸附miRNA的單鏈環(huán)狀RNA或單鏈環(huán)狀DNA，克服了傳統(tǒng)的單鏈RNA容易降解和效率低的缺點(diǎn)，能夠解除miRNA導(dǎo)致的抑癌基因“共沉默”，并且通過(guò)本發(fā)明的方法制備的單鏈環(huán)狀RNA或環(huán)狀DNA可以特異性吸附其目標(biāo)miRNA，進(jìn)而起到抑制腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡的作用，并且可以調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的比例，具有較好的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用，有望開(kāi)發(fā)為腫瘤或免疫性疾病的治療藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，更具體地，涉及一種可吸附miRNA的單鏈環(huán)狀RNA或環(huán)狀DNA及其制備方法和在制備治療腫瘤或免疫性疾病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

1、miRNA類(lèi)抑制劑的研究

MicroRNA(miRNA)是一類(lèi)內(nèi)生的、長(zhǎng)度約為18-25個(gè)核苷酸的小RNA，其在細(xì)胞內(nèi)具有多種重要的調(diào)節(jié)作用。成熟的miRNAs是由較長(zhǎng)的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物經(jīng)過(guò)一系列核酸酶的剪切加工而產(chǎn)生的，隨后組裝進(jìn)RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式識(shí)別靶mRNA，并根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。每個(gè)miRNA可以有多個(gè)靶基因，而幾個(gè)miRNA也可以調(diào)節(jié)同一個(gè)基因。這種復(fù)雜的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)既可以通過(guò)一個(gè)miRNA來(lái)調(diào)控多個(gè)基因的表達(dá)，也可以通過(guò)幾個(gè)miRNA的組合來(lái)精細(xì)調(diào)控某個(gè)基因的表達(dá)。據(jù)推測(cè)，miRNA調(diào)節(jié)著人類(lèi)三分之一的基因。最近的研究表明大約70％的哺乳動(dòng)物miRNA是位于TUs區(qū)(transcriptionunits，TUs)，且其中大部分是位于內(nèi)含子區(qū)。一些內(nèi)含子miRNA的位置在不同的物種中是高度保守的。miRNA不僅在基因位置上保守，序列上也呈現(xiàn)出高度的同源性。miRNA高度的保守性與其功能的重要性有著密切的關(guān)系。

MicroRNAs(miRNAs)能夠與mRNA的3’非編碼區(qū)(3’UTR)特異性結(jié)合，形成RISC復(fù)合體，進(jìn)而介導(dǎo)mRNA的降解或者翻譯抑制，miRNA在細(xì)胞分化、凋亡、生物發(fā)育、疾病發(fā)生等方面均起重要作用，尤其在腫瘤細(xì)胞中，一般都存在miRNA的表達(dá)異常，調(diào)控miRNA的表達(dá)是未來(lái)抗腫瘤藥物的新的研究方向。miRNA的外源調(diào)控方式主要有兩種，一種是miRNA拮抗劑，一種是miRNA類(lèi)似物，二者胞內(nèi)穩(wěn)定性均較差，作用效果不明顯，成藥性差。因此尋找一種能夠穩(wěn)定有效調(diào)控miRNA的方式變得十分重要。

現(xiàn)階段的一類(lèi)miRNA抑制劑是化學(xué)修飾的RNA單鏈，能夠與成熟miRNA序列競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，從而阻止miRNA在細(xì)胞內(nèi)與mRNA結(jié)合，由于此類(lèi)miRNA抑制劑多是單鏈的RNA，只能瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，在進(jìn)入細(xì)胞后極其不穩(wěn)定，不能持久保持作用；另一類(lèi)miRNA抑制劑是基于克隆載體的抑制劑，但是一般用量都較大，同時(shí)會(huì)被核酸酶降解。因此如何保持miRNA抑制劑的穩(wěn)定性和有效性便成了miRNA相關(guān)藥物研究的主要方面，保持miRNA抑制劑的穩(wěn)定性的方法主要有化學(xué)修飾、膠囊技術(shù)以及通過(guò)脂質(zhì)體大分子復(fù)合物包裹miRNA抑制劑，但都沒(méi)有達(dá)到特別好的效果。

2、miRNA與腫瘤及免疫性疾病的關(guān)系

隨著對(duì)miRNAs的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)miRNA的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。miRNA在腫瘤細(xì)胞中分為兩大類(lèi)，一類(lèi)是能夠與促癌基因的mRNA結(jié)合，抑制促癌基因的表達(dá)，從而起到抑制腫瘤的作用；另一類(lèi)是能夠與抑癌基因的mRNA結(jié)合，抑制抑癌基因的表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)展。因此，通過(guò)抑制促癌miRNA，同時(shí)又不影響抑癌miRNA發(fā)揮作用的藥物對(duì)于腫瘤治療將是極大地發(fā)展。