[發明專利]一種熱穩定性提高的納豆激酶有效
| 申請號： | 201711376822.X | 申請日： | 2017-12-19 |
| 公開（公告）號： | CN107937374B | 公開（公告）日： | 2020-03-06 |
| 發明（設計）人： | 周哲敏;劉中美;周麗;崔文璟;郭軍玲;趙菡 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/54 | 分類號： | C12N9/54;C12N1/21;C12N15/70;A61K38/48;A61P9/00;A61P9/10 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211 | 代理人： | 張勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 熱穩定性 提高 激酶 | ||
1.一種穩定性提高的納豆激酶突變體，其特征在于，所述突變體是(1)或(2)：
(1)將氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示的納豆激酶的第218位的天冬酰胺突變為天冬氨酸；
(2)將氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示的納豆激酶的第59位的谷氨酰胺突變為谷氨酸，同時將第218位的天冬酰胺進行突變為天冬氨酸。
2.表達權利要求1所述突變體的重組菌。
3.權利要求2所述重組菌的構建方法：將納豆激酶突變體的基因連接在載體pET24a上，以大腸桿菌BL21為宿主，構建重組菌。
4.權利要求2所述重組菌表達納豆激酶突變體的方法，其特征在于，所述方法的具體步驟如下：
(1)將重組菌接種于含卡那霉素的LB培養基，35-38℃、150-250r/min振蕩過夜培養得到種子液；
(2)將種子液按質量分數為1-2％的接種量分別接種于含卡那霉素的表達培養基中，35-38℃、150-250r/min振蕩培養至OD600至0.6-0.8時，加入誘導劑IPTG，于15-18℃誘導18-24h納豆激酶突變體的表達。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述誘導劑IPTG的濃度為0.05-0.2mM。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述表達培養基為TB培養基，所述TB培養基組分為：胰蛋白胨10-14g/L,酵母提取物20-26g/L，甘油3-8g/L，KH2PO4 2.0-2.6g/L，K2HPO4·3H2O 15.8-16.8g/L，CaCl2 0.15-0.25g/L，余量為水。
7.根據權利要求4-6任一所述的方法得到的納豆激酶突變體。
8.權利要求7所述的納豆激酶突變體在制備用于治療心腦血管疾病藥物中的應用。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于江南大學，未經江南大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201711376822.X/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
