[發(fā)明專利]一種具有篩選紅酵母作用的甲苯胺藍(lán)O及其應(yīng)用

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• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN108070632A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田子罡;陳達(dá);王春雨
• 申請（專利權(quán)）人: 博益德（北京）生物科技有限公司;天津博菲德科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12N1/14;C12P23/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發(fā)明提供了一種具有篩選紅酵母作用的甲苯胺藍(lán)O及其應(yīng)用，在紅酵母的培養(yǎng)基中添加甲苯胺藍(lán)O，造成氧脅迫環(huán)境，甲苯胺藍(lán)O與紫外誘變共同配合，能夠快速高效地篩選出高產(chǎn)類胡蘿卜素的紅酵母，類胡蘿卜素生產(chǎn)領(lǐng)域具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于酵母篩選技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種具有篩選紅酵母作用的甲苯胺藍(lán)O及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

類胡蘿卜素是一種廣泛存在于自然界中的紅色、黃色或橘色的脂溶性色素，包括β-類胡蘿卜素、蝦青素、葉黃素和蕃茄紅素等。類胡蘿卜素作為前體物質(zhì)可以生成多種具有重要生理功能的衍生物，如類維生素A、植物激素、色素及芳香類化合物等，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗氧化、抗輻射、抗腫瘤和治療光敏性疾病等重要作用，在食品、化妝品、醫(yī)藥和飼料等行業(yè)有著廣泛的應(yīng)用。

類胡蘿卜素的工業(yè)化生產(chǎn)方法主要包括化學(xué)合成法、植物提取法和生物發(fā)酵法。化學(xué)合成法技術(shù)復(fù)雜，合成的類胡蘿卜素與天然的類胡蘿卜素相去甚遠(yuǎn)，存在一定的副作用；植物提取法成本較高、工藝復(fù)雜，在工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用方面受到較大的限制；利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)類胡蘿卜素，成本低廉、工藝簡單、安全高效，目前已成為生產(chǎn)類胡蘿卜素的主要方法。

CN 104130952 A公開了一株膠紅酵母及其在發(fā)酵生產(chǎn)類胡蘿卜素和油脂中的應(yīng)用，該發(fā)明對生產(chǎn)菌株進(jìn)行多輪ARTP(常壓室溫等離子體)誘變，獲得產(chǎn)量較高的誘變菌株，對類胡蘿卜素和油脂的工業(yè)化生產(chǎn)提供有良好的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)效益。然而ARTP誘變條件繁瑣，成本較高，誘變后的菌株在自然條件下逐個培養(yǎng)單菌落，效率低下。

因此，提供一種成本較低、操作方便、產(chǎn)率高的紅酵母篩選方法，在類胡蘿卜素生產(chǎn)領(lǐng)域具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種具有篩選紅酵母作用的甲苯胺藍(lán)O及其應(yīng)用，采用甲苯胺藍(lán)O進(jìn)行紅酵母的篩選，不僅提高了篩選效率，而且提高了紅酵母的色素產(chǎn)量。

為達(dá)此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

第一方面，本發(fā)明提供了一種甲苯胺藍(lán)O作為篩選紅酵母試劑的用途。

甲苯胺藍(lán)O(toluidine blue O，TBO)是一種在強(qiáng)光下產(chǎn)生氧負(fù)離子的光敏化試劑，主要用于組織染色，本發(fā)明中通過在紅酵母的培養(yǎng)基中添加TBO，可以造成氧脅迫環(huán)境，只有高產(chǎn)類胡蘿卜素的紅酵母，才能快速生成菌落，顯著提高了紅酵母的篩選效率。

優(yōu)選地，所述甲苯胺藍(lán)O的濃度為0.1-5mmol/mL，例如可以是0.1mmol/mL、0.5mmol/mL、1.0mmol/mL、1.5mmol/mL、2.0mmol/mL、2.5mmol/mL、3.0mmol/mL、3.5mmol/mL、4.0mmol/mL、4.5mmol/mL或5.0mmol/mL，優(yōu)選為0.5-2mmol/mL，進(jìn)一步優(yōu)選為1-2mmol/mL。

第二方面，本發(fā)明提供了一種篩選試劑，所述篩選試劑包括甲苯胺藍(lán)O。

第三方面，本發(fā)明提供了一種篩選紅酵母的方法，采用如第二方面所述的篩選試劑，包括以下步驟：

(1)使用添加有甲苯胺藍(lán)O的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)紅酵母；

(2)將紅酵母懸液涂布于固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得到篩選后的紅酵母。

優(yōu)選地，步驟(1)所述甲苯胺藍(lán)O的濃度為0.1-5mmol/mL，例如可以是0.1mmol/mL、0.5mmol/mL、1.0mmol/mL、1.5mmol/mL、2.0mmol/mL、2.5mmol/mL、3.0mmol/mL、3.5mmol/mL、4.0mmol/mL、4.5mmol/mL或5.0mmol/mL，優(yōu)選為0.5-2mmol/mL，進(jìn)一步優(yōu)選為1-2mmol/mL。

優(yōu)選地，步驟(1)所述液體培養(yǎng)基為酵母浸出粉胨葡萄糖培養(yǎng)基。