[發明專利]與葡萄果皮顏色相關的SNP分子標記及應用

有效

• 申請號: 201711375280.4
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN109929942B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 孫磊;徐海英;王慧玲;張國軍;閆愛玲;王曉玥;任建成
• 申請（專利權）人: 北京市林業果樹科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.基于KASP技術開發的用于擴增與葡萄果皮顏色相關的SNP 分子標記的引物，其特征在于，包括正向引物F1、正向引物F2和反向引物R，引物序列分別如SEQ ID NO:2-4所示；

其中，與葡萄果皮顏色相關的SNP分子標記位于葡萄VvmybA3基因上，VvmybA3基因參見GenBank：AB442011.1。

2.含有權利要求1所述引物的檢測試劑或試劑盒。

3.權利要求1所述引物或權利要求2所述檢測試劑或試劑盒在葡萄果皮有色或無色早期篩選中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測葡萄樣品的DNA；

2)KASP反應：以步驟1)提取的DNA為模板，向其中加入特異的KASP Primer mix和通用的KASP Mastermix，進行PCR擴增；

3)分析PCR擴增產物；

步驟3)對PCR擴增產物進行熒光檢測分析：AA基因型對應的葡萄果皮為無色，CC或AC基因型對應的葡萄果皮為有色。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，步驟2)中KASP反應在384微孔板中進行，PCR反應體系為：總體系3μL，DNA模板1μL，KASP Primer mix 1μL，1×KASP Mastermix 1μL；其中所述KASP Primer mix中正向引物F1、F2和反向引物R的濃度均為10μM；

PCR反應條件如下：

6.權利要求1所述引物或權利要求2所述檢測試劑或試劑盒在葡萄果皮有色或無色分子標記輔助育種中的應用。

7.權利要求1所述引物或權利要求2所述檢測試劑或試劑盒在葡萄果皮有色或無色基因分型中的應用。