[發明專利]海南風吹楠ISSR-PCR分子標記方法及其專用引物在審
| 申請號： | 201711373574.3 | 申請日： | 2017-12-19 |
| 公開（公告）號： | CN108048592A | 公開（公告）日： | 2018-05-18 |
| 發明（設計）人： | 劉雄盛;蔣燚;肖玉菲;王勇;何應會;黃榮林;姜英;韋鑠星;劉菲 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區林業科學研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南寧深之意專利代理事務所(特殊普通合伙) 45123 | 代理人： | 盧穎 |
| 地址： | 530002 廣西壯*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 海南 風吹 issr pcr 分子 標記 方法 及其 專用 引物 | ||
1.一種海南風吹楠ISSR-PCR分子標記專用引物，其特征在于，所述的專用引物為SEDID No. 1~9中的任意一條。
2.一種利用權利要求1所述專用引物的海南風吹楠ISSR-PCR分子標記方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟：1）提取海南風吹楠基因組DNA；2）以步驟1）提取的基因組DNA為模板， SED ID No. 1~9中的任意一條為引物，通過ISSR-PCR擴增反應，獲得海南風吹楠天然種群遺傳信息。
3.根據權利要求2所述的海南風吹楠ISSR-PCR分子標記方法，其特征在于，所述的ISSR-PCR擴增反應體系為：20μL反應體系中10×PCR緩沖液2μL，Mg
4.根據權利要求2所述的海南風吹楠ISSR-PCR分子標記方法，其特征在于，
當所述的引物選自SEQ ID No.1時，步驟（2）進行ISSR-PCR擴增的條件為：94℃預變性3min，94℃變性45s，53.6℃退火45s，72℃延伸90s，25-45個循環，72℃總延伸5min；
當所述的引物選自SEQ ID No.2時，步驟（2）進行ISSR-PCR擴增的條件為：94℃預變性3min，94℃變性45s，51.8℃退火45s，72℃延伸90s，25-45個循環，72℃總延伸5min；
當所述的引物選自SEQ ID No.3時，步驟（2）進行ISSR-PCR擴增的條件為：94℃預變性3min，94℃變性45s，47.1℃退火45s，72℃延伸90s，25-45個循環，72℃總延伸5min；
當所述的引物選自SEQ ID No.4時，步驟（2）進行ISSR-PCR擴增的條件為：94℃預變性3min，94℃變性45s，49.2℃退火45s，72℃延伸90s，25-45個循環，72℃總延伸5min；
當所述的引物選自SEQ ID No.5時，步驟（2）進行ISSR-PCR擴增的條件為：94℃預變性3min，94℃變性45s，51.2℃退火45s，72℃延伸90s，25-45個循環，72℃總延伸5min；
當所述的引物選自SEQ ID No.6時，步驟（2）進行ISSR-PCR擴增的條件為：94℃預變性3min，94℃變性45s，52.9℃退火45s，72℃延伸90s，25-45個循環，72℃總延伸5min；
當所述的引物選自SEQ ID No.7時，步驟（2）進行ISSR-PCR擴增的條件為：94℃預變性3min，94℃變性45s，50.5℃退火45s，72℃延伸90s，25-45個循環，72℃總延伸5min；
當所述的引物選自SEQ ID No.8時，步驟（2）進行ISSR-PCR擴增的條件為：94℃預變性3min，94℃變性45s，52.8℃退火45s，72℃延伸90s，25-45個循環，72℃總延伸5min；
當所述的引物選自SEQ ID No.9時，步驟（2）進行ISSR-PCR擴增的條件為：94℃預變性3min，94℃變性45s，40.8℃退火45s，72℃延伸90s，25-45個循環，72℃總延伸5min。
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