[發(fā)明專利]HPLC檢測山楂中齊墩果酸和熊果酸的方法

在審

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• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN107831248A
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發(fā)明（設計）人: 張云平;陳啟釗;梁劍鋒
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及檢測山楂中齊墩果酸和熊果酸方法，尤其涉及一種HPLC檢測山楂中齊墩果酸和熊果酸的方法。

背景技術

齊墩果酸(oleanolic acid)和熊果酸(ursolic acid)都是五環(huán)三萜類化合物，是多種中藥材均含有的活性成分，具有保肝、消炎、抗腫瘤、調血脂、免疫雙向調解等藥理作用。其檢測的方法有分光光度法、薄層掃描和高效液相色譜法，齊墩果酸和熊果酸互為同分異構體，僅29、30位的甲基位置不同，分離存在一定困難，要將兩者分開，色譜條件的選擇非常重要，近年來采用HPLC測定的方法大多流動相組成復雜，出峰時間長，峰形和分離度不太理想。

快速溶劑萃取(ASE)是指在密閉容器內于高溫(50～200℃)和高壓(3448～20685kPa)條件下，在短時間內，用有機溶劑提取固體或半固體樣品的一種新型樣品前處理方法。與超聲、微波、回流、超臨界萃取等成熟方法相比，ASE有萃取溶劑用量少、提取時間短、萃取效率高、操作簡單方便、安全和自動化程度高等優(yōu)點。國外已有學者將這項技術應用于植物藥定量和定性分析中樣品的前處理，但在中藥材有效成分的定量和定性分析中作為樣品的前處理方法應用較少。

山楂的主要成分為黃酮類及有機酸類化合物。黃酮類化合物主要有牡荊素(vitexin)、槲皮素(quercetin)、槲皮苷(quercitin)、金絲桃苷(hyperoside)、蘆丁(rutoside)；有機酸主要有山楂酸(maslinic acid)、檸檬酸(citric acid)、齊墩果酸(oleanolic acid)，熊果酸(ur-solic acid)等。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的旨在提供一種HPLC檢測山楂中齊墩果酸和熊果酸的方法。

本發(fā)明的目的通過以下技術方案來實現(xiàn)：一種HPLC檢測山楂中齊墩果酸和熊果酸的方法，包括以下步驟：

(1)制備對照品溶液：取齊墩果酸和熊果酸的對照品分別用甲醇制成對照品溶液；

(2)制備待測樣品溶液：取山楂藥材經快速溶劑萃取，獲得的萃取液用甲醇稀釋，得到待測樣品溶液；

(3)制定標準曲線：取不同濃度的齊墩果酸和熊果酸的對照品溶液混合后上高效液相色譜儀進行定量測定，分別獲得齊墩果酸和熊果酸的標準曲線；

(4)測定待測樣品溶液：取待測樣品溶液上高效液相色譜儀進行定量測定，獲得齊墩果酸和熊果酸的峰面積，然后根據(jù)齊墩果酸和熊果酸的標準曲線獲得待測樣品中齊墩果酸和熊果酸的含量。

所述步驟(3)和(4)中的色譜條件：150mm×2.1mm，3μm Thermo Acclaim C30色譜柱，進樣量1μ量，以體積比為88∶12的乙腈-0.2％醋酸溶液為流動相，檢測波長為205nm，柱溫18℃，體積流量0.2mL/min。

所述步驟(1)中，分別精密稱取齊墩果酸對照品54.2mg至50mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成質量濃度為1.084mg/mL對照品溶液；精密稱取熊果酸對照品81.6mg至100mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成質量濃度為0.8160mg/mL對照品溶液。

所述步驟(2)中，取山楂藥材待測樣品研成粉末，精密稱取樣品粉末0.5g，與1g硅藻土混合均勻后，置預先鋪上纖維濾膜的5mL萃取池中，加入硅藻土以填滿萃取池為宜，擰緊萃取池上蓋，進行快速溶劑萃取，萃取溶劑為甲醇、萃取溫度100℃、靜態(tài)萃取時間6min、沖洗體積100％、靜態(tài)萃取1次、吹掃時間為100s，萃取結束后，把萃取液轉移至25mL量瓶中，用甲醇清洗萃取瓶3次并合并至容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得待測樣品溶液。

所述步驟(4)中，不同濃度的齊墩果酸和熊果酸的對照品溶液按體積比為1:1進行混合。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

1.本發(fā)明采用快速溶劑萃取法提取山楂藥材，時間僅需10min，提取效率大為提高。

2.本發(fā)明使用150mm×2.1mm，3μm Thermo Acclaim C30色譜柱分析時間僅為88min，分析效率提高了至少4倍。

3.流動相使用0.2％醋酸作為流動相配制過程更簡便。

具體實施方式

實施例1