[發明專利]拆分型單堿基基因編輯系統及其應用

有效

• 申請號: 201711368309.6
• 申請日: 2017-12-18
• 公開（公告）號: CN109929839B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 李大力;張曉輝;劉明耀
• 申請（專利權）人: 華東師范大學;上海邦耀生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/864
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;王正君

1.一種核酸構建物組合，其特征在于，包括第一核酸構建物和第二核酸構建物，其中，所述第一核酸構建物具有從5’-3’的式I結構：

P1-X1-X2-X3-Z-X4 (I)；

其中，P1為第一啟動子序列；

X1為胞嘧啶脫氨酶Apobec1的編碼序列；

X2為任選的連接序列；

X3為Cas9核酸酶的N端片段的編碼序列或KKH核酸酶的N端片段的編碼序列；

Z為第一融合肽N端片段的編碼序列；

X4為polyA序列；

所述第二核酸構建物具有從5’-3’的式II結構：

P2-Z-Y1-Y2-Y3 (II)；

其中，P2為第二啟動子序列；

Z為第一融合肽C端片段的編碼序列；

Y1為Cas9核酸酶的C端片段的編碼序列或KKH核酸酶的C端片段的編碼序列；

Y2為尿嘧啶糖苷酶抑制劑UGI的編碼序列；

Y3為polyA序列；

并且，各“-”獨立地為鍵或核苷酸連接序列；

所述的第一啟動子和第二啟動子各自獨立地選自下組：CAG啟動子、CMV啟動子、或其組合；

所述連接序列選自下組：XTEN、GGS、（GGS）₃、（GGS）₇、或其組合；

所述Cas9核酸酶的N端片段為登錄號為2828055的Cas9n核酸酶的2-573位氨基酸；

所述Cas9核酸酶的C端片段為登錄號為2828055Cas9n核酸酶的574-1368位氨基酸；

所述KKH的N端片段為登錄號為2828033的KKH核酸酶的2-739位氨基酸；

所述KKH的C端片段為登錄號為2828033的KKH核酸酶的740-1053位氨基酸；

所述的第一融合肽為內含肽Intein；并且所述第一融合肽N端片段為內含肽Intein的2-103位氨基酸；所述第一融合肽C端片段為內含肽Intein的104-137位氨基酸；

所述polyA序列各自獨立地選自下組：BGH的polyA、SV40的polyA、或其組合；

并且當所述第一核酸構建物中的X3為Cas9核酸酶的N端片段的編碼序列時，則所述第二核酸構建物中的Y1為Cas9核酸酶的C端片段的編碼序列；當所述第一核酸構建物中的X3為KKH核酸酶的N端片段的編碼序列時，則所述第二核酸構建物中的Y1為KKH核酸酶的C端片段的編碼序列。

2.如權利要求1所述的核酸構建物組合，其特征在于，所述的第一啟動子和第二啟動子各自獨立地為CAG啟動子。

3.如權利要求1所述的核酸構建物組合，其特征在于，所述連接序列為XTEN。

4.如權利要求1所述的核酸構建物組合，其特征的在于，所述X3元件的來源選自下組：釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、或其組合。

5.如權利要求1所述的核酸構建物組合，其特征在于，所述第一核酸構建物的長度≤4.7kb。

6.如權利要求5所述的核酸構建物組合，其特征在于，所述第一核酸構建物的長度≤4.5kb。

7.如權利要求6所述的核酸構建物組合，其特征在于，所述第一核酸構建物的長度為3.0-4.5kb。

8.如權利要求1所述的核酸構建物組合，其特征在于，所述第二核酸構建物的長度≤4.7kb。

9.如權利要求8所述的核酸構建物的組合，其特征在于，所述第二核酸構建物的長度≤4.5kb。

10.如權利要求9所述的核酸構建物的組合，其特征在于，所述第二核酸構建物的長度為3.0-4.5kb。