[發(fā)明專利]檢測新型隱球菌的成套試劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711367418.6
• 申請日: 2017-12-18
• 公開（公告）號: CN108004337B
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 江華;姜永強;鄭玉玲;張超;鄭新;劉鵬;律清宇;孔德聰
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;何葉喧

本發(fā)明公開了一種檢測新型隱球菌的成套試劑。本發(fā)明公開的檢測新型隱球菌的成套試劑由檢測或輔助檢測新型隱球菌的引物對和探針組成；所述引物由名稱分別為F和R的單鏈DNA組成；F為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；R為序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；探針的序列為序列表的序列3。實驗證明，本發(fā)明的檢測新型隱球菌的成套試劑在檢測新型隱球菌時，具有高特異性，高靈敏度以及很好的重復(fù)性與擴增效率，檢測新型隱球菌簡便、快速、準(zhǔn)確，可以用來檢測新型隱球菌和制備檢測新型隱球菌的試劑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中，檢測新型隱球菌的成套試劑。

背景技術(shù)

新型隱球菌屬于真菌，又名溶組織酵母菌(TorulaHistolytica)。屬于條件致病菌，通常情況下，人類對該菌有一定的天然免疫力。當(dāng)皮膚粘膜受創(chuàng)傷后，或在人體免疫系統(tǒng)平衡缺失時，可能導(dǎo)致病人發(fā)生嚴(yán)重感染，如血流感染等。

血流感染(bloodstream infections，BSI)是指一種或多種病原微生物侵入機體血液循環(huán)，在血液中釋放毒素，生長繁殖并釋放代謝產(chǎn)物，引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome，SIRS)。

隨著基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展，應(yīng)用于臨床實驗室血流感染檢測的分子生物學(xué)技術(shù)日益增多，如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，質(zhì)譜，基因芯片，高通量測序等。

實時熒光定量PCR中的TaqMan MGB探針法，屬于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。TaqMan MGB探針法能否實現(xiàn)針對新型隱球菌感染的全血樣本中，新型隱球菌病原體的直接檢測的關(guān)鍵，是能否設(shè)計一套靈敏度高，特異性好的引物探針，目前，國內(nèi)外文獻報道中尚未有相關(guān)MGB探針的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何檢測新型隱球菌。

本發(fā)明首先提供了用于檢測或輔助檢測新型隱球菌的成套試劑，由檢測或輔助檢測新型隱球菌的引物對和探針組成；

所述引物對由名稱分別為F和R的單鏈DNA組成；

所述F為如下(a1)或(a2)；

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列1經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述R為如下(a3)或(a4)；

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(a4)將序列2經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

所述探針的序列為如下(a5)或(a6)；

(a5)序列表的序列3；

(a6)將序列3經(jīng)過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的序列。

所述一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加具體可為1-5個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加。

所述探針可由熒光基團和淬滅基團修飾。所述熒光基團可為FAM熒光基團，所述淬滅基團可為NFQ-MGB。所述熒光基團和所述淬滅基團可位于所述探針的兩端。在本發(fā)明的一個實施例中，所述熒光基團修飾在所述探針的5′端，所述非熒光淬滅基團修飾在所述探針的3′端。

所述引物對的兩條單鏈DNA可獨立包裝，這兩條單鏈DNA的摩爾比可為1:1。

所述成套試劑中的各單鏈DNA和探針均可獨立包裝。所述成套試劑中所述引物對的兩條單鏈DNA和所述探針的摩爾比可為1：1：1。

本發(fā)明還保護所述檢測新型隱球菌的引物對。