[發明專利]非共價鍵連接法半抗原---載體免疫原的制備

在審

• 申請號: 201711365472.7
• 申請日: 2017-12-18
• 公開（公告）號: CN108051581A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 李麗華;劉文泰;李愛英
• 申請（專利權）人: 河北中醫學院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531;G01N33/545
• 代理公司: 北京思海天達知識產權代理有限公司 11203
• 代理人: 張立改

非共價鍵連接法半抗原???載體免疫原的制備，屬于免疫學檢測技術領域。通過范德華力或分子間氫鍵連接制備非共價鍵連接法半抗原???載體液相免疫原和非共價鍵連接法半抗原???載體固相免疫原。具體方法是：①半抗原溶液與載體溶液混合或者將半抗原粉劑直接加到載體溶液或動物血清稀釋液中，經攪拌、超聲震蕩、透析，制備非共價鍵連接半抗原???載體液相免疫原，采用皮下注射免疫法免疫動物；②先用載體蛋白溶液包被膜片，再行半抗原溶液包被，或者用上述半抗原???載體液相免疫原包被膜片，制備非共價鍵連接半抗原???載體包被膜片固相免疫原，采用皮下包埋膜片免疫法免疫動物。

技術領域

本發明是對迄今通用的共價鍵偶聯法半抗原-載體免疫原制備方法的改良，屬于免疫學檢測技術領域。

背景技術

半抗原的免疫分析法檢測，應用領域十分廣泛。如中藥成分、農藥殘留、飼料激素或抗生素、血藥濃度、過敏原、運動員興奮劑等領域內的檢測。然而，半抗原須與大分子載體連接成半抗原-載體復合物，才具免疫原性，才能誘生抗半抗原抗體。迄今制備半抗原-載體免疫原的通用方法，是采用化學偶聯法制備共價鍵連接的半抗原-載體免疫原。這種共價鍵連接的半抗原-載體免疫原：①必然占用半抗原的活性基團，致使本來分子量較小、結構簡單的半抗原結構發生改變，導致半抗原表位以半抗原殘基而非半抗原固有結構的形式表達。②共價鍵連接的半抗原殘基-偶聯劑殘基-載體殘基，屬于連接緊密的分子型復合物，它誘生的抗半抗原抗體，識別的多是半抗原殘基-偶聯劑殘基-載體殘基復合表位或半抗原殘基表位，而非半抗原固有表位。這可能是導致抗半抗原抗體親和力較弱、特異性較差、易發生交叉反應的重要原因之一。

發明內容

本發明的目的在于改革了迄今通用的共價鍵偶聯法制備半抗原-載體免疫原，易導致抗半抗原抗體特異性較差、親和力較低的弊端。建立非共價鍵連接法制備半抗原---載體免疫原的方法，可顯著增強誘生抗半抗原抗體的親和力和特異性，從而提高檢測敏感性。

本發明的技術方案是：通過范德華力或分子間氫鍵制備非共價鍵連接的半抗原---載體免疫原。

一種通過范德華力或分子間氫鍵連接的非共價鍵連接法半抗原---載體免疫原。包括：通過范德華力或分子間氫鍵連接的非共價鍵連接法半抗原---載體液相免疫原和非共價鍵連接法半抗原---載體固相免疫原。

具體制備方法是：

非共價鍵連接法半抗原---載體液相免疫原的制備方法，包括以下步驟：將半抗原粉劑直接加到載體溶液中，或將半抗原溶液與載體溶液混合，經超聲震蕩或攪拌，透析即得。

非共價鍵連接法半抗原---載體固相免疫原的制備方法，包括以下步驟：先用載體溶液包被膜片，再直接加入半抗原溶液行半抗原溶液包被。或用上述本發明制備的非共價鍵連接的半抗原---載體液相免疫原直接包被膜片，即得。

本發明的半抗原為常規的半抗原，載體為常規的載體。本發明通過物質間范德華力或分子間氫鍵得到的非共價鍵連接半抗原---載體免疫原：①不改變相連物質的分子結構，可保留半抗原的固有構型；②非共價鍵的鍵長遠遠長于共價鍵，在半抗原與載體間保留了較長空間距離，可使半抗原表位能夠相對獨立表達。因此，采用非共價鍵連接法半抗原---載體免疫原，是提高抗半抗原抗體特異性、增強親和力、增加半抗原檢測敏感性的重要措施之一。

實驗證實：非共價鍵連接法大黃素---BSA、共價鍵偶聯法大黃素-BSA(重氮化偶聯法大黃素-重氮鹽-BSA)包被PVDF膜片免疫原，通過膜片皮下包埋免疫法免疫大鼠，誘生抗大黃素抗血清。本發明非共價鍵連接法抗血清與大黃素反應的抗原抗體結合價顯著高于共價鍵偶聯法。在特異性方面，本發明非共價鍵連接法抗血清與大黃素呈高價結合，與大黃酚呈低價結合，不與大黃素甲醚結合；而重氮化偶聯法抗血清除與大黃素呈較高價結合外，也均與大黃酚和大黃素甲醚結合。即非共價鍵連接法半抗原---載體免疫原誘生抗體，對半抗原具有高度特異性和親和力。