[發(fā)明專利]一種降解聚苯乙烯菌種的分離篩選及其鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711360845.1
• 申請日: 2017-12-04
• 公開（公告）號: CN108220169B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發(fā)明（設計）人: 孔芳
• 申請（專利權）人: 安徽工程大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12Q1/6895;C12Q1/6869;C12Q1/04;C12R1/685
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 楊紅梅

本發(fā)明公開了一種降解聚苯乙烯菌種的分離篩選及其鑒定方法，該菌種定名為：黑曲霉(Aspergillus niger)，已于2017年10月31日提交中國普通微生物保藏中心保存，保藏編號為CGMCC No.14629。該菌種采用黃粉蟲為菌株來源體，先對選取的黃粉蟲進行喂食聚苯乙烯，然后提取黃粉蟲腸道微生物，采用多種培養(yǎng)基富集培養(yǎng)的方式進行菌種的分離篩選，并對篩選出的菌種采用自展法進行檢測，采用Neighbor?Joining法構建鄰接樹，根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育樹中組群關系對菌株進行分類，并結合菌株的形態(tài)觀察結果確定菌株的分類地位，鑒定結果顯示黃粉蟲腸道中分離出的KHJ?1菌株為黑曲霉Aspergillus niger，具有較好的降解聚苯乙烯的作用。

本發(fā)明生物材料樣品保藏單位名稱為：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址為：北京市朝陽區(qū)北辰路1號院3號，保藏日期為：2017年10月31號，保藏編號為：CGMCC No.14629，分類命名為：黑曲霉Aspergillus niger。

技術領域

本發(fā)明屬于菌種分離鑒定技術領域，具體涉及一種降解聚苯乙烯菌種的分離篩選及其鑒定方法。

背景技術

石油基塑料的環(huán)境污染是世界性難題，據(jù)統(tǒng)計，2015年全球消耗塑料年產量3億噸，其中應用最廣的熱塑性聚苯乙烯塑料占7.1％。聚苯乙烯塑料相對分子質量較高、耐腐蝕性好、穩(wěn)定性甚強，普遍認為微生物無法降解。傳統(tǒng)處理廢舊塑料的焚燒法、掩埋法均不能從根本上解決污染問題，再加工受到加工次數(shù)的限制且應用范圍較窄，為減緩塑料累積速度而研發(fā)的生物可降解塑料，并不能清除已形成的塑料垃圾。通常高聚物的降解如光氧化、臭氧誘發(fā)、催化降解及生物降解等，其中生物降解是由生長在聚合物表面或內部的微生物引起，能耗低且不會造成二次污染，因此生物法降解是綠色環(huán)保的降解方式。

黃粉蟲俗稱面包蟲，為全變態(tài)類昆蟲，研究表明黃粉蟲幼蟲可富集重金屬與微量元素于體內，并逐漸適應重金屬污染的環(huán)境，有科學報道中學生陳重光的科研實踐中發(fā)現(xiàn)黃粉蟲幼蟲可消化與吸收塑料；沈葉紅等從黃粉蟲腸道中分離出8株細菌，并對黃粉蟲降解塑料的機理進行了初步探究；楊軍等發(fā)現(xiàn)以聚苯乙烯泡沫塑料為單一食源喂養(yǎng)黃粉蟲幼蟲，100只幼蟲每天可以吃掉34-39mg的泡沫塑料；陳冠舟等以高通量測序法探究嚙食聚苯乙烯泡沫塑料黃粉蟲腸道菌群結構，揭示了腸道細菌具多樣性，并且腸道細菌可能在黃粉蟲生物降解塑料的過程中起主導作用。由于昆蟲腸道菌可分泌幫助昆蟲腸道消化的酶，具有非常豐富的物種多樣性及代謝途徑多樣性，因此從昆蟲中分離降解菌是開發(fā)高分子材料生物降解的重要途徑之一。

發(fā)明內容

根據(jù)以上現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明所要解決的技術問題是提出一種從昆蟲中分離降解聚苯乙烯菌種，并對菌種進行鑒定。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

一種降解聚苯乙烯菌種的分離篩選，具體包括如下步驟：

1)選取體態(tài)均勻的黃粉幼蟲，進行60天的聚苯乙烯白色泡沫塑料喂養(yǎng)，收集黃粉幼蟲；

2)黃粉蟲腸道微生物的分離純化：將上述收集的黃粉幼蟲依次經酒精消毒、SAB緩沖液漂洗及無菌水清洗后，解剖取出腸道，加入無菌氯化鈉溶液，無菌研磨至無可見顆粒，然后向研磨物中加入無菌氯化鈉溶液進行梯度稀釋，將稀釋液涂布于CA培養(yǎng)基、CYA培養(yǎng)基與MEA培養(yǎng)基，30℃恒溫培養(yǎng)，待菌株長出后，挑取菌株邊緣菌絲進行培養(yǎng)，反復直至純化后轉接試管中保存。

優(yōu)選的，所述酒精消毒的酒精濃度為75％，消毒時間為1min。

優(yōu)選的，所述SAB緩沖液為100ml濃度為1.5％的醋酸溶液和200ml物質量濃度2.72％醋酸鈉溶液的混合液，pH為5.6。