[發(fā)明專利]一種肝再生相關(guān)長鏈非編碼RNA及其抑制劑和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711360020.X
• 申請(qǐng)日: 2017-12-15
• 公開（公告）號(hào): CN108148836A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐存拴;張婷;靳偉;張春艷;李俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;A61K48/00;A61K31/7088;A61P37/06
• 代理公司: 北京易正達(dá)專利代理有限公司 11518
• 代理人: 趙白

本發(fā)明公開了一種肝再生相關(guān)長鏈非編碼RNA及其抑制劑和應(yīng)用。本發(fā)明通過構(gòu)建的大鼠2/3肝切除模型，采用大鼠lncRNA array v 2.0芯片篩選出肝再生中的差異表達(dá)lncRNA，用關(guān)聯(lián)推定法預(yù)測lncRNA的功能，篩選出了肝再生相關(guān)的1ncRNA TCONS_00042303，其轉(zhuǎn)錄本核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，根據(jù)該序列，設(shè)計(jì)并合成了lncRNA TCONS_00042303的抑制劑；本發(fā)明提供的抑制劑能夠抑制體外培養(yǎng)的BRL?3A細(xì)胞的lncRNA TCONS_00042303表達(dá)，促進(jìn)肝細(xì)胞增殖。本發(fā)明為治療肝移植預(yù)后輔助治療提供了新的藥物靶點(diǎn)，具有良好的應(yīng)用前景和理論價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種大鼠肝再生相關(guān)lncRNA的篩選方法，本發(fā)明還涉及一種肝再生相關(guān)長鏈非編碼RNA及其抑制劑，以及在制備調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝是機(jī)體的重要器官，有儲(chǔ)存物質(zhì)、代謝、生物轉(zhuǎn)化、解毒、造血和合成膽色素等功能。肝受物理因素、化學(xué)因素及切除等損傷后，殘肝可通過再生能力補(bǔ)償損傷/丟失的肝組織，恢復(fù)肝的結(jié)構(gòu)、重量和體積。肝細(xì)胞是肝再生的核心成分，肝再生涉及的細(xì)胞活化、增殖及凋亡等生理活動(dòng)，并與肝功能、生長發(fā)育、肝病發(fā)生等密切相關(guān)，切除肝病變區(qū)域是臨床治療肝硬化和肝癌的重要手段，在部分肝切除后，如何有效地激發(fā)殘余肝的再生潛能是術(shù)后病人得以存活的關(guān)鍵。因此，對(duì)肝切除或肝損傷誘導(dǎo)的肝再生的分子機(jī)制的研究對(duì)肝疾病的治療及藥物的開發(fā)中都具有十分重要的意義。

長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是指核苷酸數(shù)大于200nt的非編碼RNA轉(zhuǎn)錄本。lncRNA種類豐富，功能復(fù)雜，位于不同的亞細(xì)胞核區(qū)域，在不同物種間序列保守性低，有組織與發(fā)育階段特異性，同時(shí)具有快速進(jìn)化潛力。lncRNA可轉(zhuǎn)錄自基因與非基因區(qū)域，包括基因的上游區(qū)域、基因間區(qū)域、基因內(nèi)部內(nèi)含子區(qū)域等，大多數(shù)的lncRNA被確定是轉(zhuǎn)錄和翻譯過程中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在染色質(zhì)重塑、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸、細(xì)胞核亞結(jié)構(gòu)形成、干細(xì)胞多能性、體細(xì)胞重編程、發(fā)育調(diào)節(jié)、疾病發(fā)生等活動(dòng)中發(fā)揮中重要作用。已證實(shí)多種疾病尤其是癌癥如肝癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌等都涉及到lncRNA的異常表達(dá)。研究lncRNA對(duì)肝細(xì)胞增殖和肝再生的調(diào)節(jié)作用，對(duì)揭示肝再生機(jī)制、建立預(yù)防和治療肝病方法等都具有重要理論意義和應(yīng)用價(jià)值。

以RNA為靶點(diǎn)的反義寡核苷酸藥物研究已得到越來越多的重視。實(shí)驗(yàn)證實(shí)以病毒基因、腫瘤發(fā)生相關(guān)基因、細(xì)胞因子以及其他疾病相關(guān)基因?yàn)榘悬c(diǎn)的反義寡核苷酸藥物有明顯的生物學(xué)效應(yīng)。因此，從lncRNA角度篩選新的藥物靶點(diǎn)可為治療相關(guān)疾病提供了一種新的治療策略。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的提供一種長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)TCONS_00042303的應(yīng)用方法，具體是利用lncRNA TCONS_00042303為靶點(diǎn)調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖。

一種肝再生相關(guān)長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)，所述lncRNA為lncRNA TCONS_00042303，所述lncRNA TCONS_00042303轉(zhuǎn)錄本核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發(fā)明還提供了一種用于調(diào)節(jié)肝細(xì)胞增殖的抑制劑，所述抑制劑是用于調(diào)節(jié)lncRNA TCONS_00042303轉(zhuǎn)錄本核苷酸序列表達(dá)水平的DNA或RNA。

在根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該抑制劑是基于lncRNA TCONS_00042303轉(zhuǎn)錄本核苷酸序列設(shè)計(jì)的siRNA。

在根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該抑制劑選自以下6種siRNA中的一種或多種：

1)siRNA-1：SEQ ID NO：6atgatgtgggatgtacaag

2)siRNA-2：SEQ ID NO：7tgcttgatgatgtaggtcc