[發(fā)明專利]一種全人源的抗VEGF單鏈抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711359721.1
• 申請(qǐng)日: 2017-12-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108129564B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝珞琨;滿來(lái);李崢;許春萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京格根生物科技有限公司;亦康（北京）醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/22
• 分類號(hào): C07K16/22;A61K49/00;G01N33/533;G01N33/535
• 代理公司: 北京市眾天律師事務(wù)所 11478
• 代理人: 李新軍

本發(fā)明公開(kāi)了一種全人源的抗VEGF單鏈抗體，所述單鏈抗體具有獨(dú)特的CDR區(qū)，對(duì)抗原具有高度特異性的識(shí)別能力。所述單鏈抗體又具有優(yōu)異的腫瘤結(jié)合效果，其對(duì)不同類型的胰腺癌細(xì)胞系均有特異性結(jié)合。本發(fā)明還公開(kāi)了偶聯(lián)了指示劑的所述抗體在制備體外腫瘤診斷試劑和體內(nèi)生物成像劑中的應(yīng)用。當(dāng)所述成像劑應(yīng)用在腫瘤動(dòng)物模型上，標(biāo)記了近紅外熒光的該單鏈抗體可以清楚地顯示出小鼠腫瘤的大小和位置，具有極高的體內(nèi)成像能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抗體，更為具體地，本發(fā)明涉及一種單鏈抗體。

背景技術(shù)

腫瘤是威脅人類生存最大的疾病。世界衛(wèi)生組織研究顯示，2012年中國(guó)癌癥發(fā)病人數(shù)為306.5萬(wàn)，約占全球發(fā)病的五分之一；癌癥死亡人數(shù)為220.5萬(wàn)，約占全球癌癥死亡人數(shù)的四分之一。

腫瘤的臨床診斷技術(shù)也在逐漸提高。從最初的腫瘤標(biāo)記物的檢測(cè)、超聲、透視等手段，發(fā)展到現(xiàn)在更多的腫瘤相關(guān)因子的蛋白水平和分子水平的檢測(cè)、CT、核磁、PET、SPET，以及腫瘤微創(chuàng)的活檢等等技術(shù)都已在臨床上廣泛應(yīng)用。

腫瘤的診斷分為體外和體內(nèi)診斷。在體外，腫瘤組織的免疫組織化學(xué)染色是確診腫瘤的一個(gè)重要指標(biāo)。體內(nèi)診斷，一般是利用一些顯像劑再輔助一些儀器進(jìn)行腫瘤成像。腫瘤體內(nèi)成像不僅能夠早期診斷腫瘤，而且能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)抗腫瘤治療的效果以及腫瘤的進(jìn)展情況。因?yàn)樗菬o(wú)創(chuàng)檢查，給病人帶來(lái)的痛苦小，已經(jīng)成為臨床確診和治療腫瘤的必不可少的診斷手段。目前醫(yī)院常用的腫瘤體內(nèi)顯像使用的是放射性核素顯像，以及核磁。

近年來(lái)，光學(xué)成像以其非侵襲性、實(shí)時(shí)、分辨率高等優(yōu)勢(shì)廣泛應(yīng)用于腫瘤研究領(lǐng)域，可對(duì)腫瘤進(jìn)行早期診斷，反映腫瘤解剖學(xué)結(jié)構(gòu)及代謝情況。近紅外熒光成像是目前光學(xué)分子成像領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，其光譜范圍為700-1000nm，在此波段范圍內(nèi)被監(jiān)測(cè)的生物體與組織的自發(fā)熒光干擾較小，穿透組織距離可高達(dá)數(shù)厘米，提高了成像的準(zhǔn)確度和靈敏度。

用來(lái)確診腫瘤的靶點(diǎn)通常都是細(xì)胞表面蛋白。而我們發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)也可以作為一個(gè)腫瘤診斷的靶標(biāo)，VEGF是分泌型可溶性蛋白，能直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，增加血管通透性。研究表明，良性腫瘤血管生成稀少，血管生長(zhǎng)緩慢；而大多數(shù)惡性腫瘤的血管生成密集且生長(zhǎng)迅速。因此，血管生成在腫瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到重要作用，抑制這一過(guò)程將能明顯阻止腫瘤組織的發(fā)展和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的抗體可以使用在組織切片染色和confocal染色，也同樣可以使用在體內(nèi)作為腫瘤成像劑。

隨著腫瘤靶點(diǎn)不斷增多，利用特異性針對(duì)腫瘤靶抗原的抗體作為指示劑的研究也在逐漸深入。但是傳統(tǒng)的全分子抗體分子量較大，并不能很快分布到全身，也不能很好地結(jié)合一些被遮蔽的靶位，所以抗體作為指示劑的可行性大打折扣。但是基因工程技術(shù)創(chuàng)造出了僅有抗原結(jié)合功能的分子量小的抗體片段，使得這一設(shè)想得以實(shí)現(xiàn)。但是這種小分子量抗體片段在應(yīng)用中也出現(xiàn)了諸多問(wèn)題，例如穩(wěn)定性差，特異性不高，存在異源性免疫反應(yīng)、以及抗體與指示劑的偶聯(lián)適應(yīng)度不高等問(wèn)題而限制了這一診斷手段的進(jìn)一步應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

基于現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是研發(fā)出一種具有特異性識(shí)別能力的抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的單鏈抗體，進(jìn)而提供一種指示劑與該抗體偶聯(lián)的生物偶聯(lián)物，并提供該偶聯(lián)物在制備體外診斷試劑及體內(nèi)成像劑中的應(yīng)用。

基于上述發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供了一種抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的單鏈抗體，所述抗體的輕鏈的CDR1、CDR2和CDR3區(qū)的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.1、2和3所示，所述抗體的重鏈的CDR1、CDR2和CDR3區(qū)的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.5、6和7所示。

在一個(gè)優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.4和8所示。

在一個(gè)更為優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)通過(guò)連接多肽相連。