[發明專利]一種非達霉素產物提純方法

在審

• 申請號: 201711357880.8
• 申請日: 2017-12-17
• 公開（公告）號: CN109929000A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 聞建華;傅紅
• 申請（專利權）人: 天津領世生物科技開發有限公司
• 主分類號: C07H1/06
• 分類號: C07H1/06;C07H17/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了從非達霉素發酵菌絲體中分離純化非達霉素的方法。該方法是首先將非達霉素發酵液過濾、浸提，浸提液用水稀釋后通過大孔樹脂脫色、吸附、解析，所得解析液經濃縮、萃取、干燥后得非達霉素粗品；然后將非達霉素粗品用極性有機溶劑溶解，注入到含有硝酸銀的大孔吸附樹脂柱進行層析分離，得到高純度的非達霉素精粉。本發明方法有效排除了發酵次級代謝產物的干擾，提高了非達霉素的品質及產品收率。整個工藝簡單、樹脂填料成本低廉，易操作；所提純的非達霉素精粉可供藥品使用；所提純精制的非達霉素純度大于97.5%，全程總收率大于48%。所用溶劑均為常規溶劑，毒性小，適宜于工業化生產。

技術領域

本發明涉及抗生素的分離純化方法，具體地說是從非達霉素發酵菌絲體中提純非達霉素的一種方法。

背景技術

非達霉素（Fidaxomicin）是通過指孢囊菌發酵產生的一種18 元環結構的新型大環內酯類抗生素，分子式C52H74Cl2O18。非達霉素屬于窄譜型抗菌藥物，主要抗革蘭陽性需氧及厭氧菌、艱難梭菌，對耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌、產氣夾膜梭菌和腸球菌有良好的抗菌作用，而對革蘭陰性菌抗菌活性極弱。非達霉素對艱難梭菌的MIC50和MIC90均明顯低于萬古霉素或甲硝唑，治療減少艱難梭菌感染的復發率和綜合治愈率顯著優于萬古霉素和甲硝唑，且產生抗性的傾向低，具有延長的抗生素后效應、治療方案簡單、交叉耐藥性低和不良反應少等優點。

目前，提純非達霉素的方法，通常是采用非達霉素發酵菌發酵產生非達霉素，然后經過分離、純化，由此得到高純度的非達霉素。如CN200880009132公開了一種非達霉素的制備方法，該方法將大孔樹脂加入到非達霉素發酵液中，在發酵完成后，首先通過篩析從培養基中分離固體物質（包括吸收劑樹脂），用有機溶劑進行洗脫，減壓濃縮得非達霉素粗品，粗品再經過反相二氧化硅柱層析（MeOH/H2O/AcOH）、濃縮（濃縮至原始體積的三分之一）、過濾、干燥、結晶過程，可得到純度為78-94.7%的非達霉素。該方法存在以下缺點：（1）發酵液過濾后樹脂和菌絲體共存，篩分困難，樹脂難于重復利用，環保處理困難；（2）洗脫液未經脫色除雜，直接得到粗提物，含雜質較多，對下游純化介質造成的損傷大；（3）反相二氧化硅柱層析采用MeOH/H2O/AcOH的三相洗脫系統，其中醋酸不僅會破壞柱體本身的鍵合相，降低反相柱的利用率，而且醋酸沸點較高為118℃，在回收溶劑時，水和甲醇可以回收完全，但是醋酸則只能回收一部分，這樣一則回收的混合溶劑比例發生變化而無法重復使用，而造成生產成本提高，二則有一部分酸殘留于濃縮液中，有可能會與非達霉素發生反應或殘存于結晶液中而導致非達霉素精粉純度降低。CN201110104051公開的非達霉素的制備方法，是反復經過大孔樹脂、硅膠柱、凝膠柱、反相柱等層析柱進行分離，最后經薄層制備色譜進行富集。該方法的缺點是反復用多種層析柱，制備方法太復雜繁瑣，而且經過多次層析柱分離亦會使收率低，另外使用薄層制備色譜進行富集，批處理量太小，不適于規模化生產。WO2011146621A2公開的一種高純度非達霉素的制備方法，該方法用制備液相對非達霉素粗品進行制備，可得到純度大于93%的非達霉素精粉，此方法雖然步驟簡單，但是其所需設備比較昂貴，而且制備出的精粉量較少，不適合于工業化生產。

發明內容

本發明的目的就是要提供一種操作簡便、成本低廉，適于工業化規模生產的非達霉素的提純方法。為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是：首先將非達霉素發酵液過濾、浸提，浸提液用水稀釋后通過大孔樹脂脫色、吸附、解析，所得解析液經濃縮、萃取、干燥后得非達霉素粗品；然后將非達霉素粗品用極性有機溶劑溶解，注入含有硝酸銀的大孔吸附樹脂柱進行層析分離，得到高純度的非達霉素精粉，具體制備步驟包括：