[發明專利]一種大黃魚內參基因β-Actin的實時熒光定量引物及其檢測方法在審
| 申請號： | 201711353658.0 | 申請日： | 2017-12-15 |
| 公開（公告）號： | CN108103205A | 公開（公告）日： | 2018-06-01 |
| 發明（設計）人： | 沈斌;魏可;盧德政 | 申請（專利權）人： | 浙江海洋大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109 | 代理人： | 尉偉敏 |
| 地址： | 316022 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 引物 實時熒光定量 大黃魚 內參基因 檢測 瓊脂糖凝膠電泳 基因工程技術 引物擴增產物 擴增產物 上游引物 下游引物 制備引物 常規PCR 擴增 | ||
1.一種大黃魚內參基因β-Actin的實時熒光定量引物，其特征在于，引物序列為：
上游引物：5’-TC CTC GGT ATG GAA TCT TGC-3’；
下游引物：5’-GA GTA TTT ACG CTC AGG TGG G-3’。
2.根據權利要求1所述的一種大黃魚內參基因β-Actin的實時熒光定量引物的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）利用所設計的引物，制備引物擴增產物片段，然后利用所述的引物擴增產物片段進行常規PCR擴增，得到PCR反應產物；
（2）將所述的PCR反應產物用2~3%的瓊脂糖凝膠電泳25~35分鐘。
3.根據權利要求1所述的一種大黃魚內參基因β-Actin的實時熒光定量引物的檢測方法，其特征在于：所述的引物擴增產物片段中不存在錯配、二聚體和發夾結構。
4.根據權利要求1所述的一種大黃魚內參基因β-Actin的實時熒光定量引物的檢測方法，其特征在于：在步驟（1）的PCR擴增過程中，選定的模板為大黃魚組織cDNA。
5.根據權利要求1所述的一種大黃魚內參基因β-Actin的實時熒光定量引物的檢測方法，其特征在于：所述的大黃魚組織cDNA的反應濃度為40~50納克/微升。
6.根據權利要求1所述的一種大黃魚內參基因β-Actin的實時熒光定量引物的檢測方法，其特征在于：所述的常規PCR擴增反應體系為20微升反應體系，上游引物用量為0.6-0.8微升，下游引物用量為0.6-0.8微升，模板用量為0.6-0.8微升。
7.根據權利要求1所述的一種大黃魚內參基因β-Actin的實時熒光定量引物的檢測方法，其特征在于，在所述的常規PCR擴增反應過程中所述的PCR反應程序為：95℃預變性5分鐘，32個循環（95℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸15秒），72℃最終延伸10分鐘。
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