[發(fā)明專利]一種聯(lián)合檢測動脈粥樣硬化的蛋白質(zhì)芯片及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711353535.7
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN108152510A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖興華;范麗娟;項(xiàng)園;姚奧;李佳蓬;李慧;張子健;戴周彤;張同存
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢科技大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及針對動脈粥樣硬化炎癥因子的一種聯(lián)合檢測動脈粥硬化的蛋白質(zhì)芯片及其應(yīng)用，包括固相載體基片、若干特異性抗體和反應(yīng)試劑，固相載體基片由常規(guī)固相載體、位于固相載體上方生物素標(biāo)記的封閉物層、以及位于封閉物層上方的親和素層構(gòu)成，特異性抗體同時固定在固相載體基片上，且特異性抗體與動脈粥樣硬化的蛋白質(zhì)受體能夠發(fā)生抗體?抗原反應(yīng)，每種特異性抗體分別固定于固相載體形成若干個獨(dú)立識別位點(diǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案針對動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展直至最后斑塊表面破裂并發(fā)血栓全過程所涉及到的多個炎性因子CRP、Clq、IL?6和IL?1β，設(shè)計(jì)了多種炎癥因子的聯(lián)合蛋白質(zhì)芯片的檢測方法，大大提高了對動脈粥樣硬化檢測的特異性和準(zhǔn)確度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及針對動脈粥樣硬化炎癥因子的一種聯(lián)合檢測動脈粥硬化的蛋白質(zhì)芯片及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

炎癥反應(yīng)在動脈粥樣硬化(AS)的發(fā)生、發(fā)展直至最后斑塊表面破裂并發(fā)血栓形成的所有階段均發(fā)揮了作用。眾多的炎性因子可作為動脈粥樣硬化性心血管疾病的重要危險(xiǎn)因素預(yù)測因子。

動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的平滑肌細(xì)胞能分泌C反應(yīng)蛋白，其與脂蛋白結(jié)合導(dǎo)致補(bǔ)體系統(tǒng)激活，釋放大量炎癥介質(zhì)，損傷血管內(nèi)膜，導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定，促進(jìn)動脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生和發(fā)展，但其為非特異性炎癥因子。

補(bǔ)體Clq分子具有促進(jìn)吞噬和炎癥反應(yīng)的作用，在血中可與脂聯(lián)素(adiponectin，APN)結(jié)合。研究發(fā)現(xiàn)，Clq與AS風(fēng)險(xiǎn)因素呈正相關(guān)，血清Clq和Clq-APN/Total-APN在ACS患者組顯著高于對照組。血清Clq-APN/Total-APN在冠心病患者也明顯升高，是重要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。另外大量研究表明，白細(xì)胞介素-6(interleukin，IL-6)作為自分泌遞質(zhì)參與了AS的形成，而且與同斑塊的穩(wěn)定性有關(guān)，是AS的一個獨(dú)立的生物學(xué)標(biāo)記物。檢測患者IL-6水平可以一定程度反映病情的變化。IL-1β是一種促炎因子，也參與動脈粥樣硬化的炎癥反應(yīng)，并隨著動脈粥樣硬化的程度加深其水平增高。對于上述因子的定性檢測和定量檢測，目前常用的檢測方法包括酶聯(lián)免疫法，放射免疫分析，免疫印記法等，但都分別顯示出檢測指標(biāo)單一，放射性污染，靈敏度低等缺點(diǎn)。同時，膜對蛋白質(zhì)的固定只是由于膜對蛋白質(zhì)的吸附作用產(chǎn)生，固定力弱，經(jīng)反復(fù)沖洗會導(dǎo)致脫落。用膜制成的蛋白質(zhì)芯片的固相載體，信號弱且不均一。而且蛋白質(zhì)點(diǎn)陣容易在反應(yīng)過程中擴(kuò)散，點(diǎn)陣密度較大時，易造成不同點(diǎn)的信號由于距離太近而相互影響。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供了一種聯(lián)合檢測動脈粥樣硬化的蛋白質(zhì)芯片，該芯片針對動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展直至最后斑塊表面破裂并發(fā)血栓全過程所涉及到的多個炎性因子CRP、Clq、IL-6和IL-1β，設(shè)計(jì)了多種炎癥因子的聯(lián)合蛋白質(zhì)芯片的檢測方法，大大提高了對動脈粥樣硬化檢測的特異性和準(zhǔn)確度。

本發(fā)明的另一目的是提供一種聯(lián)合檢測動脈粥樣硬化的蛋白質(zhì)芯片的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種聯(lián)合檢測動脈粥樣硬化的蛋白質(zhì)芯片，包括：

(1)固相載體基片，所述固相載體基片由常規(guī)固相載體、位于固相載體上方生物素標(biāo)記的封閉物層、以及位于封閉物層上方的親和素層構(gòu)成；

(2)若干特異性抗體，所述若干特異性抗體同時固定在固相載體基片上的，所述特異性抗體與動脈粥樣硬化的蛋白質(zhì)受體能夠發(fā)生抗體-抗原反應(yīng)，每種特異性抗體分別固定于所述固相載體形成若干個獨(dú)立識別位點(diǎn)；

(3)反應(yīng)試劑，所述反應(yīng)試劑包括檢測抗體混合物，所述檢測抗體混合物為所述若干特異性抗體的混合溶液，抗體混合物的特異性抗體標(biāo)記有生物素。

作為本發(fā)明的進(jìn)一步方案，所述生物素選自生物素N-羥基丁二酰亞胺酯、長臂生物素中至少一種物質(zhì)。