[發(fā)明專利]一種小麥成熟籽粒總蛋白雙向電泳方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201711351314.6 | 申請(qǐng)日： | 2017-12-15 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN108195918B | 公開（公告）日： | 2020-12-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 周正富;雷振生;吳政卿;田保明;江雪;秦毛毛;位芳;晁岳恩;劉聰聰;何盛蓮;王美芳;李文旭;楊攀;常陽;王亞歡;徐福新 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院小麥研究所;鄭州大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | G01N27/447 | 分類號(hào)： | G01N27/447 |
| 代理公司： | 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104 | 代理人： | 時(shí)立新 |
| 地址： | 450000 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 小麥 成熟 籽粒 蛋白 雙向 電泳 方法 | ||
1.一種小麥成熟籽粒總蛋白雙向電泳方法，其特征在于，該方法具體包括如下步驟：
（1）采用直接提取法提取小麥成熟籽粒總蛋白
所述小麥為鄭麥366、濟(jì)南17、新麥18或新麥26；
所述直接提取法，具體操作步驟如下：
①用液氮將研缽與研棒預(yù)冷，然后在預(yù)冷后研缽中加入0.3g小麥成熟籽粒材料，加入10% PVP，用液氮研磨15分鐘；
②將研磨好的小麥粉盛入預(yù)冷過的2mL離心管中，加入1mL裂解液，震蕩10分鐘，充分混勻，使其呈透明粘稠液體狀；
所述裂解液組成為：7mol/L尿素，3mol/L硫脲，質(zhì)量分?jǐn)?shù)4% CHAPS，0.1%蛋白酶抑制劑，0.5%的pH=3~10的兩性電解質(zhì)；
③用液氮凍結(jié)，37℃水溶解，反復(fù)凍融3次，期間充分渦旋；
④最后室溫13000rpm離心30分鐘，取上清，即為所制備的小麥成熟籽粒總蛋白的蛋白液；
（2）第一向等電聚焦
將步驟（1）中所提取小麥成熟籽粒總蛋白進(jìn)行第一向等電聚焦，采用17cm的 IPG預(yù)制膠條時(shí)，膠條pH=5~8，蛋白上樣量設(shè)置為500μg；
（3）第二向SDS-PAGE電泳
將步驟（2）中等電聚焦后膠條進(jìn)行平衡后，進(jìn)行第二向SDS-PAGE電泳；
（4）凝膠染色
對(duì)步驟（3）中電泳結(jié)束后膠條采用考馬斯亮藍(lán)進(jìn)行染色；
（5）圖像掃描與分析
對(duì)步驟（4）中染色后電泳膠條進(jìn)行掃描獲得電泳圖譜，并進(jìn)行分析。
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