[發明專利]鄰苯二胺的四氫喹喔啉衍生物在檢測鄰二羰基化合物含量方面的用途及方法

有效

• 申請號: 201711350311.0
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN108226326B
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 高文運;李恒;王昕潔;惠先
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司 61211
• 代理人: 胡樂

本發明提出了鄰苯二胺的四氫喹喔啉衍生物在檢測鄰二羰基化合物含量方面的用途及方法，具體是以鄰苯二胺的四氫喹喔啉衍生物4?(1,2,3,4?四氫?6?喹喔啉基)?1,2?鄰苯二胺(I)、4?(1,2,3,4?四氫?2,3?二甲基?6?喹喔啉基)?1,2?鄰苯二胺(II)及其類似物III和IV等作為衍生化試劑，采用柱前衍生?HPLC法檢測不同食物樣品中鄰二羰基化合物(α?DCs)的含量。化合物I?IV被首次用作衍生化試劑測定不同食物樣品中多種α?DCs含量的柱前衍生?HPLC方法的建立。與現有柱前衍生?HPLC測定食物中α?DCs的方法相比較，本發明具有衍生化反應條件溫和穩定，操作簡便快捷的優勢。

技術領域

本發明涉及一類檢測鄰二羰基化合物(α-DCs)含量的試劑及其檢測方法。

背景技術

鄰二羰基化合物(α-DCs)，如乙二醛(Gly)、甲基乙二醛(MGly)、苯基乙二醛(PGly)、丁二酮(DA)、2,3-戊二酮(PD)、D-葡萄糖醛酮(2-KG)、1-脫氧-D-葡萄 糖醛酮(1-DG)、3-脫氧-D-葡萄糖醛酮(3-DG)，是食品在加工過程中形成的常見的降 解產物，化學式具體分別如下：

通常，在食物加工過程中食物中的糖，如葡萄糖與蛋白質中的游離氨基首先通過美拉 德反應形成早期糖基化產物，進而轉為高反應活性的α-DCs；同時，在一些食物的發酵過 程和一些生物學過程中，通過脂質氧化途徑也可以產生α-DCs。前期的研究表明，這些化合物存在于許多種類的食品中，如果汁、茶、咖啡、啤酒、醬油、牛奶、蜂蜜、一些幼兒 食品和葡萄酒等。通常，含有較大量碳水化合物、脂質或蛋白質的食物更容易產生α-DCs。 一方面，這些α-DCs在食物的感官特征中發揮重要作用，例如它們在各種食品中的含量會 影響食品的風味、味道、顏色等，從而決定食品的質量；而一些α-DCs有改善食品風味和 色澤的作用，因而它們可以作為食品添加劑在食品加工過程中廣泛應用。另一方面，這些 化合物的存在可能會介導食品蛋白質的交聯反應，從而導致食品的營養價值受損。因此， 食品中的α-DCs的含量，特別是Gly和MGly的含量，在西方國家已經作為葡萄糖毒素的 毒理學特征參數而成為食品安全質量評價的一種指標。現有的研究也已經證明，人體內存 在一些有效的機制來代謝這些羰基化合物，但當從外源性飲食中攝入過多的該類化合物時， 人體就無法將它們徹底清除，剩余的α-DCs就會積累在人體的各組織內，通過與組織內各 種蛋白相互作用而導致蛋白失去活性，從而對機體產生病理作用，導致各種各樣疾病的發 生。事實上藥理學研究已經表明，α-DCs與許多慢性疾病以及年齡相關性疾病有關，如糖 尿病慢性并發癥、心血管疾病、阿茨海默癥、帕金森病以及衰老等等。因此，基于食品的 質量控制以及保護人類健康，建立有效實用的檢測手段來量化各種食品中的α-DCs具有重 要意義。

現有的測定α-DCs的方法大多為柱前衍生-高效液相色譜法(HPLC)，這主要由于α-DCs是一類高度水溶且缺乏發色團的化合物，直接進行檢測不僅前處理過程復雜且方法的靈敏度也不盡令人滿意，而通過對它們進行衍生以引入一些具有紫外吸收或熒光的基團， 就可以提高它們的可檢測性，并增加檢測的靈敏度。現有的柱前衍生-HPLC方法中通常使 用的衍生化試劑是鄰苯二胺、它的衍生物及其類似物，這些衍生化試劑的主要缺點是衍生 反應需要在比較嚴苛的條件下進行，如幾乎所有現有的衍生化過程都需要加熱以促進反應 進程，而加熱可能會增強樣品中α-DCs前體物質的自氧化，導致α-DCs濃度增加，從而影 響測定的準確性。此外，研究還表明在衍生化試劑，如鄰苯二胺存在下，長時間加熱樣品會改變葡萄糖的自氧化途徑，進而影響樣品中α-DCs實際含量，從而使得測量結果完全不可靠。雖然也有研究表明以鄰苯二胺為衍生化試劑時反應也可在室溫下進行，但缺點是反應需要數小時才能完成，這不僅會使得測定過程冗長，而且會導致對某些α-DCs，尤其是 DA的測定不準確，因為在長時間的反應過程中，DA的前體化合物乙酰乳酸會因為非酶氧 化過程而轉化為DA。因此需要開發新的α-DCs衍生化試劑，以實現在溫和條件下(室溫 下短時間內完成衍生化反應)準確測定各種食品樣品中的α-DCs。