[發(fā)明專利]一種野生蕉開放式組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711350234.9
• 申請(qǐng)日: 2017-12-15
• 公開（公告）號(hào): CN107810856A
• 公開（公告）日: 2018-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉煒?gòu)O;林爭春;賴鐘雄;倪珊珊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供野生蕉開放式組織培養(yǎng)方法，屬于植物組織培養(yǎng)離體增殖領(lǐng)域。

背景技術(shù)

野生蕉相對(duì)于栽培蕉具有大量的抗逆基因，研究發(fā)現(xiàn)三明野生蕉具有抗寒、抗病等重要的抗逆基因，是進(jìn)行基礎(chǔ)研究的寶貴種質(zhì)資源，是香蕉生物工程研究中重要的研究材料。傳統(tǒng)意義上的香蕉離體繁殖技術(shù)，一般是在無菌條件下操作，對(duì)無菌設(shè)備要求很高。例如需要配備高壓鍋、超凈工作臺(tái)、無菌操作室等無菌設(shè)備，成本較高。本發(fā)明將開放式組織培養(yǎng)方式應(yīng)用于野生蕉離體培養(yǎng)，降低了對(duì)無菌環(huán)境的要求，也相應(yīng)的大大降低了因基礎(chǔ)設(shè)施、實(shí)驗(yàn)設(shè)備、水電消耗、無菌環(huán)境維護(hù)、人力消耗等造成的生產(chǎn)成本。且培養(yǎng)基和接種器具無需高壓，不但簡化了組培環(huán)節(jié)，節(jié)省了人力、物力，也避免了因培養(yǎng)基高壓而造成的激素和營養(yǎng)元素的損耗與流失。選用次氯酸鈉為抑菌劑，優(yōu)化其使用濃度，使用篩選出的培養(yǎng)基：MS+2.0 mg/L NAA+ 4.0 mg/L6-BA+NaClO 0.01%，可使三明野生蕉在開放式離體培養(yǎng)過程中效果最好。每升培養(yǎng)基添加次氯酸鈉的價(jià)格成本為0.06元，成本較低。故這種開放式組織培養(yǎng)的方式相對(duì)于傳統(tǒng)的組織培養(yǎng)方式操作簡便，成本大大降低。目前這種開放式組織培養(yǎng)方式在野生蕉的離體培養(yǎng)上還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種野生蕉開放式組織培養(yǎng)方法，能高效、簡便、低成本的進(jìn)行三明野生蕉離體培養(yǎng)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，采用以下技術(shù)方案：

一種野生蕉開放式組織培養(yǎng)方法，將野生蕉的組培苗在開放、自然條件下相對(duì)干凈的桌面上切去葉片、假莖，留有生長點(diǎn)的吸芽，接種到添加次氯酸鈉的培養(yǎng)基上；每瓶培養(yǎng)基接種4個(gè)吸芽；然后放進(jìn)培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)期間培養(yǎng)溫度為25℃，光照強(qiáng)度為2000 lx，光照時(shí)間為12 h/d。30天后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)其污染率及增殖系數(shù)。

所述培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L NAA+ 4.0 mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂，培養(yǎng)基中添加終濃度為0.01wt.%NaClO。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

本發(fā)明運(yùn)用三明野生蕉作為試驗(yàn)材料，次氯酸鈉作為抑菌劑，進(jìn)行野生蕉開放式組織培養(yǎng)體系的建立。開放式組織培養(yǎng)方式雖然在栽培香蕉中有應(yīng)用，但在野生蕉組織培養(yǎng)過程中還未見報(bào)道。開放式組織培養(yǎng)的應(yīng)用，可使野生蕉離體培養(yǎng)體系過程中的成本大大降低，操作簡化。因此，開放式組織培養(yǎng)體系在野生蕉上的應(yīng)用是非常有前景的，并有望做為野生蕉離體培養(yǎng)的一種重要的方式。篩選出用于野生蕉開放式組織培養(yǎng)的有效培養(yǎng)基：MS+2.0 mg/L NAA+ 4.0 mg/L6-BA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂+ NaClO 0.01%。在考慮成本的前體下，這種培養(yǎng)基在三明野生蕉開放式組織培養(yǎng)應(yīng)用過程中，三明野生蕉離體培養(yǎng)效果最好。這種開放式組織培養(yǎng)的方式在野生蕉組織培養(yǎng)過程中操作簡便，成本大大降低，可作為野生蕉離體培養(yǎng)過程中的一種簡便有效的方式。

附圖說明

圖1 是本專利中三明野生蕉在添加不同濃度的抑菌劑的培養(yǎng)基中發(fā)生褐化及污染的生長狀況示意圖。其中，圖a和b是接種在L5、L6培養(yǎng)基中的三明野生蕉發(fā)生褐化的示意圖；圖c、d、e、f是接種在L1、L3、L4培養(yǎng)基中的三明野生蕉在不同生長階段發(fā)生污染的示意圖。其中，圖c為三明野生蕉接種在L1培養(yǎng)基1-2天后發(fā)生污染的示意圖，圖d、e是三明野生蕉接種L4培養(yǎng)基后8天左右發(fā)生污染的示意圖，圖f是三明野生蕉接種L3培養(yǎng)基后15天左右發(fā)生污染的示意圖。

圖2 是本專利中接種到添加抑菌劑培養(yǎng)基中的三明野生蕉生長狀態(tài)良好及發(fā)生增殖現(xiàn)象的示意圖。其中，圖a為三明野生蕉接種到添加抑菌劑的培養(yǎng)基后前期，三明野生蕉長勢良好；圖b、c為三明野生蕉接種到L3培養(yǎng)基后發(fā)生少量增殖現(xiàn)象；圖d為接種到L4培養(yǎng)基中后三明野生蕉長勢良好但未發(fā)生增殖現(xiàn)象；圖f、i為接種到L2培養(yǎng)基后三明野生蕉長勢良好且發(fā)生大量增殖現(xiàn)象的示意圖；圖e、g、h為接種到對(duì)照培養(yǎng)基后三明野生蕉長勢良好并發(fā)生增殖現(xiàn)象的示意圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

1. 接種前準(zhǔn)備工作。

開放式組織培養(yǎng)試驗(yàn)：在相對(duì)干凈的室內(nèi)，用75%酒精將桌面擦拭干凈。將接種用到的接種刀、鑷子、濾紙、接種盤、廢液缸等接種工具用75%酒精擦拭后，無需高壓滅菌，放進(jìn)操作臺(tái)上。

對(duì)照試驗(yàn)：在接種室內(nèi)，將高壓好的接種工具等進(jìn)行高壓滅菌后，放入超凈工作臺(tái)，進(jìn)行20min 的紫外滅菌后，用于對(duì)照試驗(yàn)接種使用。

2. 培養(yǎng)基的制備