[發明專利]一種非診斷目的的大腸埃希氏菌O157:H7的快速檢測方法

在審

• 申請號: 201711346558.5
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN108303532A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 趙廣英;竇文超;葉玲嫻
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 杭州千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發明公開了一種非診斷目的的大腸埃希氏菌O157:H7的快速檢測方法。本發明的快速檢測方法以Au?Pt?SiO₂復合納米微球為載體通過結合抗體和酶形成信號轉導探針；用免疫磁性探針的超順磁性對樣品中目標物進行富集和分離；將被檢測的目的菌大腸埃希氏菌O157:H7的信號轉換為葡萄糖分子的信號，用便攜式血糖儀讀出。本發明基于血糖儀和兩種納米復合物捕獲探針和信號轉導探針，構建一種新型的經濟、簡便、快速、靈敏的檢測食品中大腸埃希氏菌O157:H7的新方法。

技術領域

本發明屬于生物學檢測技術領域，特別是涉及一種非診斷目的的大腸埃希氏菌O157:H7的快速檢測方法。

背景技術

大腸埃希氏菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7，E.Coli O157:H7)，是一種重要的食源性致病菌，屬于主要食源性致病菌的前五位之一。E.coli O157:H7主要通過污染牛肉、奶、雞肉及其制品，蔬菜等食物進行傳播。當人感染了E.Coli O157:H7后，會出現胃腸道疾病，更有嚴重者甚至發展為血小板減少性紫癜(TTP)^[8-10]。目前對E.Coli O157:H7檢測方法主要有國標法(增菌培養法)和各種PCR法等，各有優缺點。因此，建立一種更好的E.Coli O157:H7定性定量的新型快速檢測技術，具有較大現實意義。

近年來，具有高比表面積、高導電性、催化性、低毒性等諸多優點的金鉑納米微球(Au-Pt NPs)和具有高比表面積、化學性質穩定、生物相容性好等優點的二氧化硅納米粒子(SiNPs)作為納米材料領域的研究熱點，已被應用于生物分析、化學檢測、食品檢測等研究領域。Au-Pt NPs被證實具有優異的生物相容性，能夠與蛋白質中的氨基和半胱氨酸殘基相互作用穩定而迅速地吸附蛋白質且保持其活性，可用其結合抗體等生物大分子。然而，單獨的Au-Pt NPs 常因為不穩定較易發生團聚而影響蛋白標記物的活性。近期有研究發現，將SiNPs進行氨基化或者巰基化修飾，可結合Au、Ag、Pt和Pb等金屬，復合形成SiNPs/Au、SiNPs/Ag，SiNPs/Pt，結合之后不僅可以有效提高各自的分散性，降低聚集作用，還能同時擁有兩種納米材料的優點。目前，將金鉑硅納米微球(APS NPs)同時標記抗體和酶制備出信號轉導探針Ab₂/APS NPs/Invertase，應用于食源性致病菌及其他待測物檢測的研究都還未見報道。

綜上，本發明針對現有大腸埃希氏菌O157:H7檢測技術的缺陷，開發出一種大腸埃希氏菌O157:H7的快速檢測方法。本發明的快速檢測方法以APS NPs 為載體通過結合抗體和酶形成信號轉導探針(Ab₂/APS NPs/Invertase)；用免疫磁性探針(MNPs-IgG)的超順磁性對樣品中目標物進行富集和分離，將被檢測的目的菌大腸埃希氏菌O157:H7的信號轉換為葡萄糖分子的信號，用便攜式血糖儀(Personal Glucose Meter，PGM)讀出。本研究的創新點在于基于血糖儀和兩種納米復合物MNPs-IgG與Ab₂/APS NPs/Invertase分別作為捕獲探針和信號轉導探針，構建一種新型的經濟、簡便、快速、靈敏的檢測食品中的大腸埃希氏菌O157:H7的新方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種非診斷目的的大腸埃希氏菌O157:H7的快速檢測方法。本發明以基于血糖儀和兩種納米復合物MNPs-IgG與Ab₂/APS NPs/Invertase分別作為捕獲探針和信號轉導探針，實現了對食品中的大腸埃希氏菌O157:H7定性定量的快速檢測，該檢測方法經濟、簡便、快速，具有良好的靈敏度、特異性、穩定性和準確性。

為了達到上述的目的，本發明采取以下技術方案：

一種非診斷目的的大腸埃希氏菌O157:H7的快速檢測方法，包括以下步驟：