[發明專利]一種檢測茶葉中黃曲霉毒素B1的方法

在審

• 申請號: 201711345652.9
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN108051520A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 焦揚;楊亞玲;劉瑞琦
• 申請（專利權）人: 云南健牛生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測茶葉中黃曲霉毒素B1的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

（1）茶葉中黃曲霉毒素B1提取液的制備

準確稱取30.00-50.00g普洱茶樣品，準確加入體積分數為70-80%的甲醇水溶液100-150mL，劇烈振蕩2min，50±2℃水浴超聲提取20-30 min，定量濾紙過濾，備用；

（2）提取液凈化

準確移取步驟（1）提取液2~5mL，用純水定容至10mL，加入0.8-1.2mL聚多巴胺與CTAB包覆的Fe3O4納米材料和聚多巴胺與碳量子點包覆的Fe3O4納米材料的混合液，渦旋混合，外加磁場作用下分離，傾去上清液，加入體積分數10%甲醇水溶液5mL，渦旋混合，外加磁場作用下分離，傾去上清液；隨后加入1-1.2mL甲醇-三氯甲烷9：1混合液作為洗脫劑，渦旋混合，外加磁場作用下分離，收集洗脫液，備用；

（3）柱前衍生

在步驟（2）制備的洗脫液中加入體積分數30%的三氟乙酸水溶液，用甲醇定容為2mL，在365nm處，用紫外燈照射15min進行衍生反應，完成后的液體過0.45μm濾膜，待測定用；

（4） 測定

各取標準工作液和待測樣品溶液20μL，在設定的液相色譜條件下進樣，采用高效液相色譜-熒光檢測器檢測，得到待測樣品中黃曲霉毒素含量。

2.根據權利要求1所述的一種檢測茶葉中黃曲霉毒素B1的方法， 其特征在于步驟（2）所述的聚多巴胺與CTAB包覆的Fe3O4納米材料和聚多巴胺與碳量子點包覆的Fe3O4納米材料的制備包括以下步驟：

（1）Fe3O4納米材料的制備：取4.1-5.0 g硫酸亞鐵銨和2.8-4.0 g三氯化鐵，用100 mL純化水溶解后，氮氣保護下，水浴加熱至75-85℃之后，加入10 mL氨水，繼續攪拌反應30-40min，最后冷卻至室溫，用純化水洗滌3-5次，真空干燥后，即得Fe3O4 納米材料；

（2）聚多巴胺與CTAB包覆的Fe3O4納米材料的制備：取步驟（2）制備的Fe3O4納米材料1-2g，分散在30-50mL去離子水和25-35 mL 10 mM 的多巴胺溶液中，并用0.1 M NaOH調pH為8.5，加入0.02-0.05 g過硫酸鉀，常溫攪拌3-5h；然后加入0.2-0.5g CTAB，繼續攪拌2-3h，外加磁場作用下固液分離，并用去離子水和乙醇各洗滌3~4次，真空干燥后，即得聚多巴胺與CTAB包覆的Fe3O4納米材料；

（3）碳量子點制備：稱取2.0-5.0g多巴胺加入到100mL超純水中，超聲5 min形成白色懸濁液，并轉移至聚四氟乙烯反應釜，于200-220℃加熱8-12 h，自然冷卻后，先用孔徑為0.22μm濾膜過濾，后用截留分子量為3000-3500Da 的透析袋進行透析處理24 h，得到水溶性碳量子點；

（4）SiO2包覆的Fe3O4納米材料的制備：取步驟（1）制備的Fe3O4納米材料1.69 g溶于120mL乙醇溶液中，用氨水調pH至9，加入1.4-2.0mL正硅酸四乙酯，攪拌3-5h；外加磁場作用下固液分離，產物用去離子水和乙醇各洗滌3-4次，真空干燥后，即制得SiO2包覆的Fe3O4納米材料；

（5）聚多巴胺與碳量子點包覆的Fe3O4納米材料的制備：取步驟（4）制備的SiO2包覆的Fe3O4納米材料0.5-1g，分散在50mL的去離子水中，加入0.1-0.2 g多巴胺和0.01-0.02 g過硫酸鉀，攪拌均勻，用0.1 M NaOH調pH至8.0，將溶液轉移到200 mL的聚四氟乙烯反應釜中，在200℃加熱2-3h；自然冷卻后，使用去離子水和乙醇各洗滌2~3次，真空干燥后，即得聚多巴胺與碳量子點包覆的Fe3O4納米材料。