[發明專利]一種獸用注射型滅活疫苗佐劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201711345591.6
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN107823641A
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 魏凱;朱瑞良;孫振紅;馬麗莉
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/145;A61P37/04;A61P31/16
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司37205
• 代理人: 苗峻,趙斌

技術領域

本發明涉及動物免疫領域，具體涉及一種獸用注射型滅活疫苗佐劑及其制備方法。

背景技術

滅活疫苗通常是指先對病毒或細菌進行培養，用加熱或化學劑(通常是福爾馬林)將其滅活，然后與免疫佐劑配合制成的疫苗。特別是在畜牧養殖業，滅活疫苗作為最常用的常規疫苗，因其良好的安全性和較長的保護期，廣泛應用于預防傳染病的發生。獸用滅活疫苗生產時，免疫佐劑是必不可少的。臨床上常用的獸用滅活疫苗佐劑有白油佐劑、氫氧化鋁佐劑、蜂膠等，其中白油佐劑是最常用的獸用疫苗佐劑，其作用主要是有效延長抗原釋放時間，使抗原持續刺激機體產生免疫應答反應，并且能夠增加抗原表面積，從而有利于巨噬細胞捕獲抗原。然而，其缺點也是顯而易見的：1)成本高，商品化的優質白油每噸萬元以上；2)生產工藝復雜，需要添加多種表面活性劑以及專業的乳化設備；3)抗原配比有限，最大抗原量配比為1:1，多數病毒抗原需要濃縮才能達到要求；4)機體吸收緩慢，應激反應大，易出現組織損傷、生產性能下降甚至死亡等副反應；5)穩定性較差，尤其在夏季高溫和長時間儲存時易出現水油分層現象。因此，探尋白油佐劑的替代品對于注射型獸用疫苗的發展具有重要意義。

發明內容

本發明的主要目的就在于克服上述現有技術的不足，提供一種獸用注射型滅活疫苗佐劑及其制備方法，所述佐劑由質量比為2.5-7.5:0.5-1.5:91-97的海藻酸鈉、松花粉多糖和無菌水組成，用以代替常用的白油佐劑等；本發明的有益效果是：所提供的獸用注射型滅活疫苗佐劑制備工藝簡單、成本低、成分簡單、劑型穩定，易儲存，易于注射，使用方便，作用效果好，無毒副反應，在畜牧業中的開發利用潛力巨大，具有廣闊的應用前景。

本發明所采用的海藻酸鈉是海藻酸轉化成的鈉鹽，是從褐藻類的海帶或馬尾藻中提取碘和甘露醇之后的副產物，其分子由β-D-甘露糖醛酸(β-D-mannuronic，M)和α-L-古洛糖醛酸(α-L-guluronic，G)按(1→4)鍵連接而成，是一種天然多糖類生物高分子聚合物，無毒，具有藥物制劑輔料所需的穩定性、溶解性、粘性和安全性，且便宜易得，目前已經在食品工業和醫藥領域得到了廣泛應用。海藻酸鈉為白色或淡黃色粉末，幾乎無臭無味，易溶于水，不溶于乙醇、乙醚、氯仿等有機溶劑。海藻酸鈉粉末分子量分布比較寬，加入水中后，微粒間的水合作用使海藻酸鈉的表面具有粘性，根據分子量大小可分為超高、高、中及低等粘度，其在pH為6-11間的溶液時穩定性好，pH<6時溶液就會析出海藻酸，pH>11時溶液會凝聚，pH＝7時海藻酸鈉溶液最為穩定。海藻酸鈉作為一種線性多糖，其分子鏈在溶液中呈線團狀分布，具有良好的生物相容性，并能控制藥物在特定的部位以特定的速率釋放，起到緩釋的作用，并且對機體無刺激性，吸收完全。上述特點十分符合疫苗佐劑的要求。然而現有技術中海藻酸鈉在醫學上多與氯化鈣或殼聚糖等反應制備成凝膠或微膠囊，用于包載藥物、抗原、細胞、基因、蛋白等，用于藥物治療、口服疫苗和組織修復等，但是尚未有將其作為注射用疫苗佐劑的應用。

松花粉多糖是從馬尾松和油松等松科植物的花粉中提取的天然多糖，主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和巖藻糖等單糖組成。松花粉多糖是保持松花粉特效的主要營養成份之一，具有非常高的生物活性，松花粉破壁后多糖提取量顯著提高。研究證明，松花粉多糖能活化T細胞、B細胞、巨噬細胞等免疫細胞，有效促進機體分泌抗體和細胞因子，作為疫苗佐劑使用可以提高滅活疫苗和亞單位疫苗的免疫效果，且對機體無毒副作用。此外，松花粉多糖為水溶性多糖，具有非常高的親水性和粘性，作為滅活疫苗佐劑，可以有效延緩抗原釋放。然而，松花粉多糖的價格是限制其使用的最大障礙。在已發表的相關研究中，單獨使用松花粉多糖作為疫苗佐劑時，其使用劑量一般大于20mg/mL濃度才能起到良好的免疫增強效果，40mg/mL效果最佳。松花粉的原料成本均價在一百多元每千克，按粗多糖提率10％計算，每百克松花粉多糖(含提取成本)成本在150元左右，那么按40mg/mL濃度配制1L獸用疫苗，僅松花粉多糖佐劑的成本就在60元以上，這個價格遠遠高于白油佐劑的價格，以致于獸用疫苗生產廠家難以接受。本發明首次將海藻酸鈉作為獸用滅活疫苗佐劑，并添加少量的松花粉多糖作為復合佐劑，即可以產生顯著的免疫增強效果。不僅為海藻酸鈉開拓了一個新用途，還為松花粉多糖在獸用疫苗領域的開發應用提供了可能，大大降低了注射疫苗的成本。

本發明的以下技術方案如下：