[發明專利]熒光定量PCR法檢測外周血CA242 mRNA的試劑盒

在審

• 申請號: 201711343885.5
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN109929913A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 安徽普元生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種實時熒光定量PCR檢測外周血CA242 mRNA的試劑盒，該試劑盒通過逆轉錄（RT）mRNA樣品得到cDNA,再結合實時熒光定量PCR檢測技術，可以定量檢測標本CA242 的 mRNA表達量。本發明所提供的試劑盒可以用于臨床及科研中檢測患者的外周血中CA242的表達，為胰腺癌患者的確定及預后的判斷提供重要的參考依據。

技術領域

本發明屬生物技術領域，為一種通過逆轉錄(RT) mRNA樣品得到cDNA,再結合實時熒光定量PCR檢測技術，可以精確定量檢測標本中人外周血CA242 mRNA的表達量的試劑盒。

背景技術

本發明屬生物技術領域，為一種通過逆轉錄(RT) mRNA樣品得到cDNA,再結合實時熒光定量PCR檢測技術，可以精確定量檢測標本中人外周血CA242 mRNA的表達量的試劑盒。

胰腺癌是一種惡性程度很高，診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤，約90%為起源于腺管上皮的導管腺癌。其發病率和死亡率近年來明顯上升。5年生存率<1%，是預后最差的惡性腫瘤之一。許多患者確診時即已為晚期，失去了最佳的手術時機。即使早期胰腺癌患者，有很大一部分患者5年內死于復發和轉移。其原因可能是在術前或術時已有非常少量腫瘤細胞，轉移到血液、淋巴結、骨髓、或其它遠處器官，形成腫瘤微轉移，而普通的檢測方法不能發現。

早期發現、早期診斷是胰腺癌早期治療的基礎和前提，也是有效提高胰腺癌患者生存率、改善其預后的重要保證。由于癌瘤早期體積微小，采用B超、CT掃描等手段均難以早期發現。血液轉移是腫瘤擴散的主要途徑之一，因此在患者外周血進行腫瘤細胞基因表達檢測、腫瘤特異性標記產物檢測是了解腫瘤轉移情況的一個有效的方式，因而腫瘤標記物的檢測對腫瘤形成及轉移的診斷具有極大的幫助。但是在腫瘤轉移發生的早期，外周血中的腫瘤細胞很少，無法完全依賴病理形態檢查，同時腫瘤特異性抗原的含量也很少，也很難通過常用的ELISA或RIA等方法檢測到，因此對循環血中的微量腫瘤細胞基因表達和一些特異產物檢測的研究，引起了人們的廣泛關注。

聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物技術，是位于體外的特殊DNA復制，能將微量的DNA大幅增加。TaqMan 熒光定量PCR技術及相應檢測儀器的推出使得人們可以在利用PCR高靈敏性的情況下，對PCR產物進行實時精確定量檢測，不僅解決了PCR的定量問題，而且還大大提高了檢測的特異性。因此我們通過熒光定量PCR技術檢測外周血中微量腫瘤細胞，熒光定量PCR技術有著病理學或ELISA/RIA等方法無法比擬的高靈敏度和相對的高特異性，為外周血中微量腫瘤細胞的檢測帶來了希望。

CA242是目前發現的胰腺癌最具特異性腫瘤標志物之一，其特異性高表達于胰腺癌，正常成人外周血中均不表達，因此CA242的陽性表達可作為胰腺癌的標志物之一。因而檢測外周血中CA242 mRNA的表達能為胰腺癌的確定及預后的判斷提供重要的參考依據。

發明內容

本發明試劑盒包含：紅細胞裂解液、總RNA抽提試劑、無RNA酶的水、反轉錄緩沖液、dNTP混合物、逆轉錄酶儲存液、PCR反應液、探針、標準品、對照品；除標準品用TE溶解外，其他各種溶液所用溶劑均為純化水；

檢測用引物分檢測用上游引物和檢測用下游引物：

上游引物序列為：P1： 5'-AATTAAAGTGAGGGTCTCGGAGAA-3'；

下游引物序列為：P2： 5'-AGAGGTCGCAGGAAGAAATATCA-3'

熒光探針序列為：5'-FAM-TGAGAGGCCCCGCTG-TAMRA-3'

標準品序列為：

AATTAAAGTGAGGGTCTCGGAGAAGAAGCAGGAACTGAGTTTCCTGAGAGGCCCCGCTGAGGCTTTGTTGATATTTCTTCCTGCGACCTCT