[發明專利]MicroRNA 21 (MIR21)核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）

在審

• 申請號: 201711343778.2
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN109929921A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 安徽普元生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明為一種microRNA 21 (MIR21)核酸定量檢測試劑盒（PCR?熒光探針法）。通過RT?PCR的方法，將樣品中的RNA逆轉錄得到相應的cDNA，再利用特定的引物和探針，結合實時熒光定量PCR檢測技術，可以準確檢測樣本中microRNA 21 (MIR21)的表達量。此種檢測方法可以對食管癌患者的外周血血清樣本中的microRNA 21 (MIR21)進行定量分析，臨床上可以用以輔助診斷和評價預后的治療效果。本發明通過分子學上的醫學檢測手段來指導臨床治療，具有一定的臨床價值。

技術領域

本發明屬于生物技術人領域，為通過逆轉錄（RT）RNA樣品得到cDNA，現結合實時熒光定量PCR技術，可以精確定量檢測標本中人microRNA 21 (MIR21)表達量的試劑盒。

背景技術

據中國腫瘤登記中心的數據顯示，2015年中國新增430萬癌癥病例，癌癥死亡病例超過281萬，占據全年死亡人數比例的28.82%，居于世界首位，即平均每天就有超過7500人死于癌癥。食管癌是常見的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬人死于食管癌。其發病率和死亡率各國差異很大。我國是世界上食管癌高發地區之一，每年平均病死約15萬人。男多于女，發病年齡多在40歲以上。

目前，肺癌已成為我國首位惡性腫瘤死亡原因，且發病率和死亡率仍在繼續迅速上升。食管癌、胃癌、肝癌緊隨其后，我國食管癌發病率已躍居全球首位，每年的發病率和死亡率也在不斷上升。

現今，食管癌是已成為人類健康的重大威脅。目前, 手術切除、化療、放療及內分泌治療依然是食管癌治療的主要方法。在上述技術已經達到相當成熟和普及的同時，高復發和轉移率也依然是食管癌患者面臨的主要問題，這些問題的出現對患者的有效生存期起著重要的影響，嚴重危害著腫瘤患者術后的生活質量。那么如何在患者術后檢測其腫瘤的復發和轉移成了眾多學者的研究課題。2000年以后，很多學者都在研究將分子生物學領域應用到人類健康課題上來，至今已經十幾年，由此而發展的體外檢測技術也在不斷成熟和完善中。其中TaqMan熒光定量PCR就是其中的一種體外診斷技術。

由于TaqMan熒光定量PCR具有重復性好，結果準確可靠的特點，所以在醫學檢測方面，一些常規檢測方法所不能解決的問題可以以此解決。 一般來說細胞形態學檢查可直接觀測到腫瘤細胞，但僅限于組織的病理檢測。由于腫瘤脫落至血循環中的數目微小，這種檢查的敏感性和特異性均較差，陽性率僅為1%。后期的免疫組織化學方法提高了檢出率，但該技術生產復雜，且需要特異性的抗體，而且假陽性率也高。TaqMan熒光定量PCR與這些技術相比，有著明顯的優點，由于有些腫瘤可轉錄特異性mRNA，但無相應蛋白合成，故熒光定量PCR應用范圍較蛋白廣泛；另外只要知道待測基因序列，即可設計合成引物探針進行逆轉錄及擴增，操作方便；同時該方法具有較高的靈敏度及可重復性，保證了醫學檢測結果的準確性。

以microRNA 21 (MIR21)檢測為例，microRNA 21 (MIR21)是食管癌的特異性的生物標志物，在健康人外周血中含量很低或檢測不到microRNA 21 (MIR21)，而在復發和轉移的食管患者中，如果癌細胞脫落于血液中，在血清或血漿中就會產生microRNA 21(MIR21)，便可以檢測到。與此同時，TaqMan熒光定量PCR技術具有很好的靈敏性和特異性，有針對性的對食管癌患者外周血及腫瘤組織﹑骨髓等樣本中的microRNA 21 (MIR21)的表達進行檢測，便可以對食管癌細胞血行播散等診斷提供重要的依據。所以該技術的應用，將會對早期食管癌患者的診斷、指導臨床治療、改善患者預后產生極為重要的作用。

發明內容

本發明為一種microRNA 21 (MIR21)核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法），含有4種組分，分別為： 一步法RT-PCR反應液（360μL/管），陽性對照品（50μL/管）、陰性對照品（50μL/管）、2×10⁶copies/μl標準品（20μL/管）主要成份組成。