[發明專利]一種玉米種子超低溫保存的改進方法

在審

• 申請號: 201711343620.5
• 申請日: 2017-12-07
• 公開（公告）號: CN109892323A
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 中禾生物種業集團有限公司
• 主分類號: A01N3/00
• 分類號: A01N3/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

在超低溫下保存植物種子是能夠實現種子長期保存的方法。本發明實現了在PEG4000和甘油，還有羥丙甲基纖維素，氯化鈉進行簡單處理后的種子，通過特殊的處理手法和步驟，可以高效的在超低溫狀態下進行植物種子的長期保存，并且通過本方法對比常規的超低溫保存方法，能夠在種子解凍后獲得高活力，高出芽率的種子。

技術領域

本方法涉及到一種植物種子超低溫保存的技術，通過改進的超低溫保存方法和處理手段，能夠最大限度的增大植物種子冷凍復蘇后的存活力。

背景技術

種子的超低溫保存，是指利用液氮等其它技術和冷源，使得種子在超低溫下新陳代謝基本停止，遺傳與裂變不發生的情況下的種子低溫保存技術。在超低溫下保存的生物資源相比于其它保存方法，不有強烈的組織破壞性，而且也不污染環境，免于病蟲害的侵擾，具有保存物質的持久性，穩定性等一系列的優點。經過超低溫下保存的種子資源，其化學成分不變，遺傳組分也無任何改變，經過解凍后可以直接運用于下游的各種育種的分子生物學實驗，非常的方便。但是利用超低溫下保存玉米種子資源，也存在著種子資源超低溫解凍后存活率低，發芽率低，出芽后適應期長，生長速度慢等一系列問題。

為了更好的進行玉米各品種的資源研究，以及啟動進行玉米各品種資源鑒定和資源保護的研究。發展新的改進方法，尋找一種有效而且價廉的方法，在超低溫下進行有效的玉米種子保存技術，解決種子超低溫保存后的出芽復蘇率低的問題已經迫在眉睫。

為此，我們實驗室經過各種實驗優化程序，找到了一種適宜玉米種子在超低溫下保存的最佳和最便宜的途徑。經過多次各種實驗條件驗證，有優良效果并且顯著的提高了超低溫解凍之后的種子的出芽率，存活率，以及種子出芽后的生長速度。

發明內容

目的是為了更好的保存植物的種子，解決在超低溫保存植物種子的過程中，如何進一步增大種子復蘇后活力，出芽率等等問題。

附圖說明

經過我們的凍存步驟特殊處理的濮玉5號玉米種子，相比對于傳統的凍存濮玉5號玉米種子的方法，具有明顯更優良的適應環境的表現。在同樣的復活步驟處理的過程中，經過特殊凍存步驟處理后的種子，發芽率高，其早期的生長也比傳統處理方法生長更快，生長也更旺盛。保存種子出芽效果對比圖，圖1沒有改進直接凍存后的種子出芽情況，圖2改進后經過保護方法處理后的凍存種子出芽情況。種子出芽率和已發芽的種子一周的株高長度(單位cm，α＝0.01極為顯著差異)

具體實施方式

對于傳統的凍存方法，是將種子在低溫下進行直接保存。本實驗室發展出了一套精細的簡單處理玉米種子凍存方法與流程，可以顯著的增加凍存后復蘇的效果。

配置聚乙二醇PEG4000和甘油混合的保存液若干量，至少需要能裝下所需要的種子。兩者的濃度比例為1∶1。經過多次試驗，我們確定采用混合的保護液配方，更有利于超低溫保護種子。另外，配制羥丙甲基纖維素氯化鈉無菌水緩沖液，濃度為羥丙甲基纖維素0.5％，氯化鈉為0.5M/L。將種子先至于無菌的聚乙二醇PEG和甘油混合的保存液中5分鐘，然后再至于無菌的羥丙甲基纖維素氯化鈉緩沖液中浸泡5分鐘。

這個方法實施的具體過程是

1在控制溫度為25度，濕度為60％的小房間中，準備一盆裝有37度的預熱的無菌水，在此溫度下準備玉米種子若干。37度的預熱的無菌水提前配制且預熱，無菌的聚乙二醇PEG和甘油1∶1混合的保存液也要事先混合配制好，還有無菌的羥丙甲基纖維素氯化鈉緩沖液0.5％(含氯化鈉為0.5M/L)也都提前配制并且37度預熱。

2準備一個空的滅菌超低溫保存管，當然需要管的體積要足夠大，足以裝下玉米的種子

3選擇飽滿而且稍微紅暈的玉米種子，在超凈臺中，將玉米種子用雙氧水滅菌消毒，然后再用無菌水沖洗玉米種子3遍待用。