[發明專利]發酵法生產酪氨酸的大腸桿菌及其構建方法與應用

有效

• 申請號: 201711343436.0
• 申請日: 2017-12-15
• 公開（公告）號: CN109929786B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 王欽宏;曹鵬;陳五九;彭彥峰;吳鳳禮;張媛媛
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/90;C12P13/22;C12R1/19
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 仝林葉

1.生產酪氨酸的大腸桿菌重組菌株TYR012，其通過降低或解除TYR002重組菌中預苯酸脫氫酶的代謝產物反饋抑制并提高該酶的活性而得到，大腸桿菌重組菌株TYR002，其通過上調3-脫氫酶莽草酸脫氫酶aroE的表達而增強3-脫氫莽草酸脫氫酶酶活；

所述大腸桿菌重組菌種TYR002是以已進行改造的大腸桿菌WJ060，保藏號為CGMCC No.14602為基礎，通過對3-脫氫酶莽草酸脫氫酶基因aroE進行表達調控構建獲得，是通過兩次同源重組的方法，是aroE起始密碼子上游插入的合成調控元件P1替換為合成調控元件P4，P1其序列如SEQ ID NO:1所示，P4其序列如SEQ ID NO:4所示，并且把稀有起始密碼子TTG替換為原始起始密碼子ATG。

2.根據權利要求1所述大腸桿菌重組菌株TYR012的構建方法，包括如下步驟：以重組菌株TYR002為出發菌株，采用同源重組方法，將預苯酸脫氫酶編碼基因序列替換為如SEQ IDNO:8所示序列和/或在預苯酸脫氫酶編碼基因起始密碼子ATG上游插入合成調控元件P4。

3.生產酪氨酸的大腸桿菌重組菌株TYR024，其通過抑制如權利要求1所述的TYR012重組菌中鄰氨基苯甲酸合酶和/或抑制預苯酸脫水酶的活性而得到。

4.權利要求3所述大腸桿菌重組菌株TYR024的構建方法，包括如下步驟：

以重組菌株TYR012為出發菌株，采用同源重組方法，在鄰氨基苯甲酸合酶編碼基因的起始密碼子ATG上游插入合成調控元件P5和/或將鄰氨基苯甲酸合酶編碼基因的起始密碼子ATG替換為密碼子TTG或GTG和將預苯酸脫水酶編碼基因敲除；P5其序列如SEQ ID NO:5所示。

5.生產酪氨酸的大腸桿菌重組菌株TYR042，其通過同時提高如權利要求3所述的TYR024重組菌中莽草酸激酶、5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶、分支酸合酶、酪氨酸轉氨酶的活性而得到。

6.權利要求5所述大腸桿菌重組菌株TYR042的構建方法，包括如下步驟：

以重組菌株TYR024為出發菌株，采用同源重組方法，在莽草酸激酶編碼基因的起始密碼子ATG上游插入合成調控元件P4和在5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶編碼基因的起始密碼子ATG上游插入合成調控元件P4和在分支酸合酶編碼基因的起始密碼子ATG上游插入合成調控元件P4和在酪氨酸轉氨酶編碼基因的起始密碼子ATG上游插入合成調控元件P4。

7.根據權利要求5所述生產酪氨酸的大腸桿菌重組菌株TYR042，其保藏編號為CGMCCNo. 14833。

8.權利要求1、3、5或7中任一所述重組菌株在生產酪氨酸中的應用。