[發明專利]一種破傷風類毒素誘導的靈長類動物遲發型超敏反應動物模型的構建方法

在審

• 申請號: 201711341498.8
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN109954134A
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發明（設計）人: 楊楠;俞誠;楊平;曾佳;段繼峰
• 申請（專利權）人: 澎立生物醫藥技術（上海）有限公司
• 主分類號: A61K39/08
• 分類號: A61K39/08;A61K49/00
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發明涉及生物醫學研究技術領域，特別涉及一種破傷風類毒素誘導的靈長類動物遲發型超敏反應動物模型的構建方法。該方案中包括以下步驟：以不同生物活性的破傷風類毒素疫苗作為致敏用溶液和攻擊用溶液；第0d，除第1組外所有動物由4mg/kg的氯胺酮麻醉，經注射80IU/mL破傷風類毒素疫苗；在兩側大腿的肌肉內注射破傷風類毒素疫苗；4周后，用同樣方法加強免疫一次；第9周，再次麻醉動物，對模型動物通過皮下注射0.1mL的破傷風類毒素疫苗進行攻擊，對照組動物用不含破傷風類毒素的氫氧化鋁佐劑進行攻擊。本發明能夠有效的建立一種非人靈長類動物遲發型超敏反應動物模型，提供與人更為相關的DTH反應進程并提高實驗數據的可信度。

技術領域

本發明涉及生物醫學研究技術領域，特別涉及一種破傷風類毒素誘導的靈長類動物遲發型超敏反應動物模型的構建方法。

背景技術

遲發型超敏反應(DTH)是典型的細胞介導的IV型超敏反應，巨噬細胞及敏化的CD4+T細胞是引起細胞及組織損傷的主要因素。人群中，DTH反應被用作經典的細胞免疫反應測試，以測試此前對特定抗原的暴露，并可簡單的由皮下注射該抗原而引發。在臨床前實驗中，DTH動物模型被廣泛用于新型免疫抑制劑和免疫調節劑的評價，以及疫苗開發的過程。毫不意外地，在嚙齒類動物身上所觀察到的藥效往往和人類身上有很大不同。該不同主要由于用于人類的生物制劑和嚙齒類動物往往不具備交叉反應性，且人類為遠親生殖，其個體差異遠遠大于近親繁殖的嚙齒類動物。

故急需建立一種非人靈長類動物遲發型超敏反應動物模型，來提供與人更為相關的DTH反應進程并提高實驗數據的可信度。

發明內容

鑒于以上問題，本發明提供了一種破傷風類毒素誘導的靈長類動物遲發型超敏反應動物模型的構建方法，來提供與人更為相關的DTH反應進程并提高實驗數據的可信度。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：一種破傷風類毒素誘導的靈長類動物遲發型超敏反應動物模型的構建方法，包括以下步驟：

首先將動物分為兩組：第1組為正常對照組，第2組為模型組。以破傷風類毒素疫苗作為致敏用溶液；將破傷風類毒素疫苗用1.5mg/mL的氫氧化鋁佐劑稀釋后混勻，作為攻擊用溶液；第0d，除第1組外所有動物由4mg/kg的氯胺酮麻醉，經注射80IU/mL破傷風類毒素疫苗，在麻醉效果不理想的情況下，使用含1.5-5％異氟烷的0.8-1.5L/min氧氣做進一步吸入麻醉；在兩側大腿的肌肉內注射破傷風類毒素疫苗；4周后，用同樣方法加強免疫一次；第9周，再次麻醉動物，除第1組外，其余動物均通過皮下注射0.1mL的破傷風類毒素疫苗進行攻擊，注射位點在腹部兩側，每側5點，平行排列，第1組的動物用不含破傷風類毒素的氫氧化鋁佐劑進行攻擊。

所述作為致敏用溶液破傷風類毒素疫苗的生物活性為80IU/mL。

所述攻擊用溶液的破傷風類毒素疫苗稀釋為25IU/mL。

所述在兩側大腿的肌肉內注射的破傷風類毒素疫苗的量為1.0mL，且每側 0.5mL。

本發明提供了與人更為相關的DTH反應進程并提高實驗數據的可信度中的應用。

本發明的優點和有益效果在于：提供一種非人靈長類動物遲發型超敏反應動物模型，來提供與人更為相關的DTH反應進程并提高實驗數據的可信度。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動性的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為注射位點紅斑，水腫和皮膚硬化評分。**p<0.01造模后與正常動物相比。