[發明專利]一種具有熒光標記的核酸分型標準物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711339546.X
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN107964562B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 李生斌;伏東科;楊日華;李波
• 申請（專利權）人: 深圳華大法醫科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6876
• 分類號: C12Q1/6876;C12N15/11;G01N27/447
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

本發明公開了一種具有熒光標記的核酸分型標準物及其制備方法和應用。本發明首先保護一種核酸電泳標準物，由20個DNA片段組成；所述20個DNA片段的末端均具有熒光染料標記；所述20個DNA片段用于標識如下20種核酸大小：75bp、90bp、100bp、115bp、135bp、150bp、160bp、180bp、200bp、225bp、250bp、275bp、300bp、340bp、350bp、380bp、400bp、450bp、490bp、500bp。本發明提供的具有熒光標記的核酸分型標準物，標準片段的數量增多，提高了內標校準能力，減少了偏差，校準結果更加準確。

技術領域

本發明涉及一種具有熒光標記的核酸分型標準物及其制備方法和應用。

背景技術

毛細管凝膠電泳技術(Capillary Electrophoresis,CE)又稱高效毛細管電泳(HPCE)或毛細管分離法(CESM)，是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅動力，當帶電溶質在電場作用下通過凝膠的多孔性結構時，將會因溶質分子大小不同而產生不同的阻力，根據樣品中各組分之間遷移速度和分配行為上的差異而實現分離的一類液相分離技術。1987年，Cohen發表了毛細管凝膠電泳的工作。電泳從凝膠板上轉移到毛細管中以后，分析靈敏度提高到能檢測一個堿基的變化，分離效率高達百萬理論塔板數；分析片段能大能小，小到能分辨單個核苷酸的序列，大到能分離Mb的DNA；分析時間由原來的以小時計算縮減到以分、秒計算。被廣泛用于DNA片段大小分析，應用于測序、SNP檢測、法醫DNA分型等。

核酸分型標準物是指一組分子量已知的DNA分子的混合物，電泳后按照其分子量的大小和遷移率的不同，在凝膠上形成一個DNA片段分布的梯度，用以指示電泳過程中的未知DNA樣本的分子量。與傳統的分子量標準相比，核酸分型標準物(又稱分子量內對照)與待測樣品在同一泳道內電泳，二者運動規律完全一致，因此校對結果更加準確。結合毛細管凝膠電泳技術的高靈敏度、高分離效果，能夠同時對大量差異不小于1bp的DNA片段實現快速準確分離。

目前市面上常用的分子量內標，如ABI的LIZ-500，其由15條帶有LIZ熒光素標記的雙鏈DNA片段組成(分子量分別是：50bp、75bp、100bp、139bp、150bp、160bp、200bp、250bp、300bp、340bp、350bp、400bp、450bp、490bp和500bp)，其片段較少、部分區間的DNA片段較稀疏。在STR分型的過程中，由于遺傳分析儀上Buffer、POP膠和甲酰胺等可能出現過期或不合格現象，在復合擴增的片段較多的情況下，當擴增的片段比較大且大小相近且標記引物顏色相同時，不能保證單個堿基分辨率，導致分型不成功。

發明內容

本發明的目的是提供一種具有熒光標記的核酸分型標準物及其制備方法和應用。

本發明首先保護一種核酸電泳標準物，由20個DNA片段組成；所述20個DNA片段的末端均具有熒光染料標記；所述20個DNA片段用于標識如下20種核酸大小：75bp、90bp、100bp、115bp、135bp、150bp、160bp、180bp、200bp、225bp、250bp、275bp、300bp、340bp、350bp、380bp、400bp、450bp、490bp、500bp。

所述20個DNA片段的5’末端均具有熒光染料標記。

所述20個DNA片段具體如下：80bp片段、95bp片段、105bp片段、119bp片段、138bp片段、152bp片段、162bp片段、182bp片段、202bp片段、227bp片段、253bp片段、278bp片段、303bp片段、342bp片段、352bp片段、383bp片段、403bp片段、453bp片段、493bp片段、503bp片段。