[發明專利]一種檢測雙歧桿菌的培養基及檢測方法

有效

• 申請號: 201711338464.3
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN107805656B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 羅星曉;付日留;楊云;黃惠英
• 申請（專利權）人: 合生元（廣州）健康產品有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/06;C12R1/01
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 劉偉;趙青朵

1.一種檢測雙歧桿菌的培養基，其特征在于，由基礎培養基、乳糖和半胱氨酸鹽酸鹽組成；其中，所述基礎培養基由哥倫比亞血瓊脂基礎培養基、棉子糖、氯化鋰、丙酸鈉和水制成，pH 5.1。

2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述基礎培養基中各成分的用量為哥倫比亞血瓊脂基礎培養基38g/L、棉子糖0.5g/L-1g/L、氯化鋰2.5-3.5g/L、丙酸鈉4g/L-6g/L，余量為水。

3.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述乳糖的終濃度為3v/v％～7v/v％。

4.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述半胱氨酸鹽酸鹽的終濃度為500μg/mL～1000μg/mL。

5.權利要求1所述檢測雙歧桿菌的培養基的制備方法，其特征在于，分別制備基礎培養基、乳糖儲備液、半胱氨酸鹽酸鹽儲備液，除菌后將乳糖儲備液和半胱氨酸鹽酸鹽儲備液加入冷卻的基礎培養基中混勻后傾倒平皿。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述基礎培養基的制備方法為分別取配方量的哥倫比亞血瓊脂基礎培養基、棉子糖、氯化鋰、丙酸鈉和水混勻，調pH值至5.1，高壓蒸汽滅菌法除菌；所述乳糖儲備液的制備方法為取乳糖加入水中混勻，微孔濾膜過濾除菌；所述半胱氨酸鹽酸鹽儲備液制備方法為取半胱氨酸鹽酸鹽加入到水中，微孔濾膜過濾除菌。

7.一種檢測雙歧桿菌的方法，其特征在于，以權利要求1所述的培養基培養待測樣品后計數。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法具體為待測樣品用無菌磷酸鹽緩沖溶液進行梯度稀釋，然后選擇2-3個連續的稀釋度的待測樣品菌液，分別吸取0.1mL涂布于權利要求1所述的培養基平板中，于36±1℃、厭氧培養72h±2h后計數平板上的所有菌落數。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述的梯度稀釋為無菌操作稱取10g待測樣品于無菌均質袋中，加入90ml無菌磷酸鹽緩沖溶液，于8000r/min-10000r/min均質1min-2min，制成1:10待測樣品菌液，無菌吸管吸取1:10待測樣品菌液1ml，沿管壁緩慢注于裝有9ml無菌磷酸鹽緩沖溶液的試管中，振搖試管使其混合均勻，制成1:100的待測樣品菌液；按上述操作順序，做10倍遞增的梯度稀釋；所述的計數具體為記錄稀釋倍數和相應的菌落數量，菌落計數以菌落形成單位CFU表示，選取菌落數在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數，低于30CFU的平板記錄具體菌落數，大于300CFU的可記錄為多不可計。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，還包括報告菌落數的步驟，具體為以CFU/g為單位報告，菌落數小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數報告；菌落數大于或等于100CFU時，第3位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數字，后面用0代替位數。