[發明專利]一株能穩定表達抗干擾素γ的基因工程單鏈抗體株及應用

有效

• 申請號: 201711338429.1
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN108060113B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 王榮智;楊航;王俊程;鐘燕芳;汪世華;凌素美
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/13;C12N15/70;G01N33/68;C12R1/19
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明屬于抗體工程領域，具體涉及一株能穩定表達抗干擾素γ（IFN?γ）的基因工程單鏈抗體株及其應用。本發明通過基因工程手段在體外克隆干擾素γ的基因，構建原核表達載體，IPTG誘導表達純化獲得可溶的干擾素抗原蛋白。利用噬菌體展示技術，淘選出能穩定分泌表達抗（IFN?γ）的基因工程單鏈抗體株，并通過構建原核表達載體表達純化出具有功能的單鏈抗體，利用競爭ELISA方法，實現對人血液中IFN?γ的定性與定量檢測，為商品化的開發生產高質量的酶聯免疫檢測試劑盒和金標抗體檢測卡奠定了基礎。

技術領域

本發明屬于抗體工程領域，具體涉及一株能穩定表達抗干擾素γ的基因工程單鏈抗體株及其應用。

背景技術

干擾素γ（Interferon-γ, IFN-γ）是一種主要由活化T細胞和自然殺傷細胞（NK細胞）產生分泌的細胞因子，屬于是II型干擾素的唯一成員。干擾素γ單體是由六個α螺旋組成一個核心和在C端區延伸展開的片斷序列。具有生物活性的干擾素γ二聚體是由兩個反平行相互鎖定的單體形成，廣泛存在于人類和哺乳動物的血液中。干擾素γ具有抗病毒、免疫調節及抗腫瘤特性。還有研究報道，干擾素可以用來治療傳染病，但也能促成自身免疫。

目前，針對人血液中的干擾素γ檢測技術普遍采用的是電化學類方法，主要包括環化金屬銥傳感器檢測（Cyclometalated iridium（III）complex conductor）、微型可視化電傳感器（Micropatterned apatamer-modified electrodes）、基于DNA適配體電化學檢測（DNA aptamer-based electrochemical biosensor）等。上述的基于電化學方法的干擾素γ檢測雖然具有較高的檢測靈敏度，但是檢測耗時且對樣品的純度要求高，操作復雜、環境要求高且穩定性差、需要專業的檢測機構和技術人員，因此不適合推廣和用于實際臨床血液樣品中干擾素γ的快速準確的檢測。免疫分析法（Immuno-analysis）方法是近十多年來發展起來的新方法，是將抗原抗體反應與靈敏的檢測系統結合而成的一種分析方法，具有特異性好、靈敏度高、操作技術簡單、成本低、對樣品的純度要求不高等優點，特別適合于大批量樣本的檢測，近年來被廣泛普及應用于各種毒素的檢測。

干擾素γ是抗原刺激下淋巴細胞所產生的。干擾素γ具有很強的抗病毒活性，而且干擾素能夠抑制多種病毒的增殖，在醫學上是一類廣譜的抗病毒藥物。同時，干擾素γ是評估機體細胞免疫應答的重要檢測指標，在實際的臨床醫學中具有極其重要檢測和診斷意義。為此，對于醫院、研究所和衛生防疫部門來說，更需要一個簡便、快速、靈敏的方法對干擾素γ進行檢測。但目前為止，基于基因工程抗體的對干擾素γ進行免疫學檢測方法的研究還沒見報道。因此，制備針對干擾素γ的高親和力特異性強的基因工程抗體并建立基于基因工程抗體的免疫學檢測方法，為最終開發基于基因工程抗體的商品化檢測試劑盒與膠體金檢測卡奠定了基礎。

發明內容

本發明的目的是提供一株能穩定表達高親和力的抗干擾素γ（IFN-γ）基因工程單鏈抗體株。

本發明首先提供一株抗IFN-γ毒素的基因工程單鏈抗體株pET28a-mbp-linker-scFv-A8/ BL21。

所述抗體株為大腸埃希氏菌（Escherichia coli）pET28a-mbp-linker-scFv-A8/BL21，已于2017年11月6日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏號為CGMCC No .14860，地址為北京市朝陽區北層西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。

其次提供一種有所述的單鏈抗體株pET28a-mbp-linker-scFv- A8/BL21表達的單鏈抗體。

所述的基因工程單鏈抗體的制備方法，是將噬菌體展示淘選得到的單鏈抗體基因擴增，克隆到原核表達載體中，并轉化大腸桿菌BL21進行IPTG誘導表達純化，獲得的具有IFN-γ抗原結合活性的單鏈抗體。