[發明專利]一種利用水溶性高分子通過漢奇反應檢測細胞內甲醛含量的方法

有效

• 申請號: 201711338115.1
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN109959640B
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發明（設計）人: 陶磊;劉國強
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;吳愛琴

本發明提供一種檢測細胞內甲醛含量的方法。以帶有β?二酮結構的水溶性聚合物為原料，通過漢奇反應來檢測細胞內甲醛的含量。該方法原料安全，檢測實時，靈敏度高，選擇性好，有望應用于醫療檢測領域。

技術領域

本發明屬于材料領域，具體涉及一種利用水溶性高分子通過漢奇反應檢測細胞內甲醛含量的方法。

背景技術

甲醛是結構最為簡單的醛類，是一種對人體及環境帶來毒性和污染的物質。而人體內通過一些脫甲基酶和氧化酶的作用也會產生一些內源性甲醛，一般人體細胞內的甲醛含量為100-400μmol/L。已有眾多報道稱體內的甲醛含量過高會導致一些疾病，如阿爾茲海默癥，以及還有一些癌癥類等。所以必要且急需研究出一種對細胞內的甲醛含量檢測的方法。傳統細胞內檢測甲醛的方法主要通過設計一些熒光探針，存在結構復雜，靈敏度不高，檢測限低，實時性不強的缺點。而傳統的方法也包括以乙酰丙酮與銨鹽為原料，通過漢奇反應來檢測細胞內甲醛含量。但乙酰丙酮毒性較大，且熒光信號弱，不易保存，在使用推廣方面存在一定的缺陷。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測細胞內甲醛含量的方法。以帶有β-二酮結構的水溶性聚合物為原料，通過漢奇反應來檢測細胞內甲醛的含量。該方法原料安全，檢測實時，靈敏度高，選擇性好，有望應用于醫療檢測領域。

本發明所提供的檢測細胞內甲醛含量的方法，包括下述步驟：

1)配制用于檢測細胞內甲醛的檢測液；

2)將上述用于檢測細胞內甲醛的檢測液與細胞接觸，待細胞吞食后，移去檢測液，加入已知濃度的甲醛溶液，檢測細胞上的熒光強度，重復上述操作檢測加入一系列已知濃度的甲醛溶液后細胞上的熒光強度，得到細胞上的熒光強度與甲醛濃度的關系；

3)將上述用于檢測細胞內甲醛的檢測液與甲醛含量待測的細胞接觸，待細胞吞食后，移去檢測液，檢測細胞上的熒光強度，參照步驟2)中得出的熒光強度與甲醛濃度的關系，得到細胞內甲醛的含量。

上述方法步驟1)中，所述用于檢測細胞內甲醛的檢測液，為：帶有β-二酮結構的水溶性聚合物和銨鹽的溶液。

其中，所用溶劑可為本領域人員知曉的，任何能夠適合細胞檢測的緩沖液，如PBS緩沖液。

其中，所述帶有β-二酮結構的水溶性聚合物，具體可為式I所示的聚合物：

式I中，x、y和n均表示聚合度，x＝20-50，y＝20-50，n＝10-30。

所述銨鹽可選自：氯化銨，硫酸銨，乙酸銨等，具體可為乙酸銨。

所述帶有β-二酮結構的水溶性聚合物(按照二酮的物質的量計算)與銨鹽的摩爾比可為1:1-1:10。

上述式I所示的帶有β-二酮結構的水溶性聚合物，由式II所示的聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯和式III所示的乙酰乙酸甲基丙烯酸乙二醇酯共聚制備得到：

式II中，n表示聚合度，n＝10-30。

上述方法步驟2)中，所述一系列已知濃度的甲醛溶液的濃度為0-100μmol/L范圍內的濃度值。

上述方法中所使用的用于檢測細胞內甲醛的檢測液也屬于本發明的保護范圍。

本發明旨在提供一種通過漢奇反應來檢測細胞內甲醛的方法思路，使用的帶有β-二酮結構的水溶性聚合物包括聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯和乙酰乙酸甲基丙烯酸乙二醇酯的共聚物，但不限于此。

本發明進一步改進了傳統檢測甲醛的漢奇反應，傳統方法使用乙酰丙酮作為β-二酮的來源，相比而言，乙酰丙酮的安全性較低，而且產物熒光強度弱，所以采用具有二酮結構的聚合物來提升安全性，并增強熒光強度。