[發明專利]一種核酸提取和檢測的試劑裝置、試劑及方法

有效

• 申請號: 201711334738.1
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN107828633B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發明（設計）人: 解信美;苗保剛;彭年才;李明;李紅東
• 申請（專利權）人: 蘇州天隆生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12N15/10;C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/689;C12Q1/14;C12Q1/04;C12Q1/6806
• 代理公司: 蘇州集律知識產權代理事務所(普通合伙) 32269
• 代理人: 安紀平

1.一種核酸提取和檢測的試劑裝置，其特征在于：所述試劑裝置包括核酸提取腔室和核酸檢測腔室，所述核酸提取腔室內預封裝有用于核酸提取及純化的第一試劑，所述核酸檢測腔室內預封裝有用于核酸檢測的第二試劑，所述第一試劑包括細胞裂解液、核酸洗滌液及核酸洗脫液；所述第二試劑包括檢測多種病原體的五種PCR試劑，所述五種PCR試劑包括多重PCR反應緩沖液、DNA聚合酶、所述多種病原體的特異性引物及探針，以及內質控的特異性引物及探針；所述五種PCR試劑分別為封裝于不同核酸檢測腔室的第一PCR試劑，第二PCR試劑，第三PCR試劑，第四PCR試劑及第五PCR試劑；每份PCR試劑檢測四個熒光檢測通道，其中三個熒光通道檢測三種不同的呼吸道病原體，另一個通道檢測內質控，所述五種PCR試劑為PCR凍干試劑，

所述第一PCR試劑由多重PCR反應緩沖液、逆轉錄酶、DNA聚合酶、甲型流感病毒的特異性引物及探針、乙型流感病毒的特異性引物及探針、呼吸道合胞病毒的特異性引物及探針、內質控的特異性引物及探針組成；

所述第二PCR試劑包括由多重PCR反應緩沖液、逆轉錄酶、DNA聚合酶、人偏肺病毒的特異性引物及探針、腺病毒的特異性引物及探針、鼻病毒和腸病毒的特異性引物及探針、內質控的特異性引物及探針組成；

所述第三PCR試劑由多重PCR反應緩沖液、逆轉錄酶、DNA聚合酶、副流感病毒1型的特異性引物及探針、副流感病毒2型的特異性引物及探針、副流感病毒3型的特異性引物及探針、內質控的特異性引物及探針組成；

所述第四PCR試劑由多重PCR反應緩沖液、DNA聚合酶、肺炎支原體的特異性引物及探針、肺炎衣原體的特異性引物及探針、百日咳桿菌的特異性引物及探針、內質控的特異性引物及探針組成；

所述第五PCR試劑由多重PCR反應緩沖液、DNA聚合酶、流感嗜血桿菌的特異性引物及探針、嗜肺軍團菌的特異性引物及探針、肺炎鏈球菌的特異性引物及探針、內質控的特異性引物及探針組成；

檢測病原體的特異性引物及探針的序列為：

其中，F為上游引物序列，R為下游引物序列，P為雙標記探針序列。

2.根據權利要求1所述的核酸提取和檢測的 試劑裝置，其特征在于：所述細胞裂解液，核酸洗滌液及核酸洗脫液分別封裝于不同的一個或多個核酸提取腔室內。

3.根據權利要求1所述的核酸提取和檢測的 試劑裝置，其特征在于：

所述細胞裂解液包括：15～20mM的Tris-HCl、3～7mM的EDTA、0.05～0.08％的SDS、30～40％的TritonX-100，以及內質控質粒模板；

所述核酸洗滌液包括：5～10mM的Tris-HCl、0.1～0.5mM的EDTA及0.7％的NaCl；

所述核酸洗脫液包括1～5mM的Tris-HCl。

4.根據權利要求1所述的核酸提取和檢測的 試劑裝置，其特征在于：所述DNA聚合酶為2～3U，所述逆轉錄酶為5～10U，RNA酶抑制劑為5～10U。