[發明專利]一種CYP2C9和/或VKORC1基因多態性快速檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201711332336.8
• 申請日: 2017-12-13
• 公開（公告）號: CN107841540B
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 彭璨璨;許嘉森;吳詩揚;劉蘇燕;劉志明
• 申請（專利權）人: 益善生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

1.一種檢測CYP2C9和/或VKORC1基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有下列組分：熱啟動taq DNA聚合酶、10X血液直接PCR緩沖液、引物對、探針對和UNG酶；

所述引物對為選自以下中的至少一組：針對CYP2C9 C430T的SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.4、針對CYP2C9 A1075C的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.10，針對VKORC1 G-1639A的SEQ IDNO.13和SEQ ID NO.16；

所述探針為選自以下針對相應引物位點的突變型探針和野生型探針的至少一組：針對CYP2C9 C430T的SEQ ID NO.22和SEQ ID NO.19、針對CYP2C9 A1075C的SEQ ID NO.28和SEQID NO.25，針對VKORC1 G-1639A的SEQ ID NO.34和SEQ ID NO.31，探針的5'端和3'端標記有熒光基團；

所述10X血液直接PCR緩沖液包括有：100±1mM Tris-HCL、500±5mM KCl、20±1mMMgCl₂、50±5％甘油、25±1％DMSO、0.5±0.05％Tween-20，pH8.3±0.1。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述10X血液直接PCR緩沖液包括有100mM Tris-HCL、500mM KCl、20mM MgCl₂、50％甘油、25％DMSO、0.5％Tween-20，pH8.3。

3.根據權利要求1-2任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述引物為針對CYP2C9 C430T的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4、針對CYP2C9 A1075C的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.10，和針對VKORC1 G-1639A的SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.16；

所述探針為針對CYP2C9 C430T的SEQ ID NO.22和SEQ ID NO.19、針對CYP2C9 A1075C的SEQ ID NO.28和SEQ ID NO.25，和針對VKORC1 G-1639A的SEQ ID NO.34和SEQ IDNO.31。

4.根據權利要求1-2任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光基團為：探針的5'標記有VIC或FAM，3'標記有MGB。

5.權利要求1-4所述試劑盒的使用方法，其特征在于，包括：

(1)配置PCR反應體系，每個PCR體系包含下列組分：熱啟動Taq DNA酶、10X血液直接PCR緩沖液、引物對、探針對、dNTPs、UNG酶；并加入待測的人血液樣品；

(2)將配置好的PCR體系放入熒光定量PCR儀中，進行Real-time PCR檢測；反應條件為：

第一階段：50℃2分鐘UNG處理；

第二階段：95℃4分鐘預變性；

第三階段：95℃15s，60℃35s，5個循環；

第四階段：95℃15s，60℃35s，40個循環；

信號收集：第四階段60℃時收集FAM和VIC信號。