[發(fā)明專(zhuān)利]一種造血干細(xì)胞凍存新方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711327506.3
• 申請(qǐng)日: 2017-12-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107853290A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱郎平
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 朱郎平
• 主分類(lèi)號(hào): A01N1/02
• 分類(lèi)號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種造血干細(xì)胞凍存方法。

背景技術(shù)

造血干細(xì)胞是血液系統(tǒng)中的成體干細(xì)胞，是一個(gè)異質(zhì)性的群體，具有長(zhǎng)期自我更新的能力和分化成各類(lèi)成熟血細(xì)胞的潛能。它是研究歷史最長(zhǎng)且最為深入的一類(lèi)成體干細(xì)胞，對(duì)研究各類(lèi)干細(xì)胞，包括腫瘤干細(xì)胞，具有重要指導(dǎo)意義。血液系統(tǒng)中的成熟細(xì)胞壽命極短，因此在人的一生中，造血干細(xì)胞需要根據(jù)機(jī)體的生理需求適時(shí)的補(bǔ)充血液系統(tǒng)各個(gè)成熟細(xì)胞組分。同時(shí)在損傷、炎癥等應(yīng)激狀態(tài)下，造血干細(xì)胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個(gè)細(xì)胞組分的生理平衡的角色。造血干細(xì)胞在臨床上應(yīng)用極為廣泛，造血干細(xì)胞凍存是保證造血干細(xì)胞移植成功的關(guān)鍵技術(shù)之一，故其凍存方式尤為重要。目前臨床造血干細(xì)胞凍存有-196℃液氮程控降溫保存和-80℃非程控降溫保存，前者能長(zhǎng)期保存且細(xì)胞損傷少，一般可保存23～25年，但操作復(fù)雜、設(shè)備昂貴，解凍后有細(xì)胞凝集現(xiàn)象，后者可保存干細(xì)胞1～2年，其操作相對(duì)簡(jiǎn)便、費(fèi)用低，但保存細(xì)胞時(shí)間及細(xì)胞活性受限。探索一種操作簡(jiǎn)便、快速、成本低廉及保存時(shí)間更長(zhǎng)的干細(xì)胞凍存方法，對(duì)于臨床造血干細(xì)胞的儲(chǔ)存、應(yīng)用及造血干細(xì)胞移植成功具有重要意義。在造血干細(xì)胞的凍存中，使用的凍存劑及方法均非常重要。目前應(yīng)用于-80℃低溫保存干細(xì)胞的保護(hù)劑有二甲基亞砜(下稱(chēng)DMSO)、CP-1、羥乙基淀粉、RPMI1640培養(yǎng)基、人血白蛋白等，不同的保護(hù)劑的配方及使用方法差異較大，對(duì)干細(xì)胞的保存效果與保存時(shí)間也存在差異，多數(shù)保存細(xì)胞的存活率為80％左右，干細(xì)胞安全難以保證，一些凍存方法還存在操作復(fù)雜缺點(diǎn)。

專(zhuān)利號(hào)2015107320043，專(zhuān)利名稱(chēng)為一種造血干細(xì)胞凍存新方法的發(fā)明專(zhuān)利，我公司目前已經(jīng)取得該公司的專(zhuān)利技術(shù)許可，按照該方案進(jìn)行造血干細(xì)胞凍存細(xì)胞存活率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)凍存方法，我公司研發(fā)工程師在該專(zhuān)利方案的基礎(chǔ)之上開(kāi)展了更進(jìn)一步的研究，目前可以使得細(xì)胞存活率更高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種造血干細(xì)胞的冷凍保存方法，細(xì)胞存活率更高，本發(fā)明克服了傳統(tǒng)的技術(shù)偏見(jiàn)。

為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種造血干細(xì)胞凍存新方法，其特征在于：包括橡皮塞、多孔蓬松海綿單元以及密封容器；

密封容器的頂部設(shè)置有一開(kāi)口，開(kāi)口上設(shè)置有橡皮塞，多孔蓬松海綿單元設(shè)置于密封容器內(nèi)部，多孔蓬松海綿單元的孔徑大于3毫米；

第一步，準(zhǔn)備一個(gè)消毒后的注射器，注射器的針孔插入橡皮塞，利用注射器將密封容器內(nèi)的空氣抽完；

第二步，利用注射器將事先高溫處理過(guò)的(常溫)空氣注入到密封容器內(nèi)，使得密封容器內(nèi)的壓強(qiáng)介于1.5-2.5個(gè)大氣壓之間；

第三步，取造血干細(xì)胞保護(hù)劑、造血干細(xì)胞懸液或骨髓液，體積比為1-2:6；將造血干細(xì)胞懸液或骨髓液與造血干細(xì)胞保護(hù)劑混合均勻，通過(guò)注射器注入到密封容器內(nèi)，輕輕的搖晃密封容器2-3分鐘，然后將密封容器放入-80℃冰箱保存12小時(shí)；

第四步，取出上述的造血干細(xì)胞懸液或骨髓液與造血干細(xì)胞保護(hù)劑混合液，然后再次利用注射器加入造血干細(xì)胞保護(hù)劑,造血干細(xì)胞保護(hù)劑與混合液的體積比為1：3，再次輕輕地?fù)u晃密封容器2-3分鐘，然后將密封容器放入-80℃冰箱保存；

所述的造血干細(xì)胞保護(hù)劑由試劑A和試劑B組成，試劑A與試劑B的體積比為2：3；

所述試劑A由二甲基亞砜、RPMI1640無(wú)菌培養(yǎng)基、羥乙基淀粉組成，溶劑為生理鹽水，二甲基亞砜、RPMI1640無(wú)菌培養(yǎng)基、羥乙基淀粉的質(zhì)量百分比分別為30％、5％、15％；

所述試劑B為人血白蛋白溶液，人血白蛋白的質(zhì)量百分比為10％。

更加優(yōu)選的技術(shù)方案，所述的造血干細(xì)胞保護(hù)劑、造血干細(xì)胞懸液或骨髓液的體積比為1.5:6。

以上體積的單位均為ml。

其中第三步中造血干細(xì)胞保護(hù)劑與混合液的體積比為1：3，混合液指第二步造血干細(xì)胞懸液或骨髓液與造血干細(xì)胞保護(hù)劑混合均勻得到的混合液。

二甲基亞砜(DMSO)具有高極性、高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性好、與水混溶的特性，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多數(shù)有機(jī)物，被譽(yù)為“萬(wàn)能溶劑”。