[發明專利]一種鯔魚魚鱗鐵螯合肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201711316614.0
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN107936113B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 郁迪;趙文浩;王斌
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/16;C12P21/06
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

本發明公開了一種鯔魚魚鱗鐵螯合肽，ESI/MS檢測分子量為974.12Da。本發明也公布了該鯔魚魚鱗鐵螯合肽的制備方法。有益效果為：本發明所公開鯔魚魚鱗鐵螯合肽具有高的鐵螯合活性，將其用于補鐵保健品，可大大提高人體對鐵離子的吸收；所公開的鯔魚魚鱗鐵螯合肽的制備方法條件溫和，鐵螯合肽的提取率高，純度大，苦味和腥味小，生物活性好，使鯔魚魚鱗變廢為寶，具有良好的社會經濟效益；鯔魚魚鱗的酶解過程中酶的利用度高，單位酶產肽量大，產物的抑制效應小。

技術領域

本發明涉及水產品精深加工技術領域，特別是涉及一種鯔魚魚鱗鐵螯合肽及其制備方法。

背景技術

生物活性肽是指由20個氨基酸以不同組成和排列方式構成的從二肽到復雜的線性、環形結構的不同肽類的總稱。活性肽具有多種人體代謝和生理調節功能，易消化吸收，食用安全性極高，是當前極具發展前景的功能因子，成為藥物及保健品研究的熱點。目前，蛋白酶解生產的活性肽主要來源于陸地蛋白源，而海洋生物生存環境明顯區別于陸地環境，其蛋白質的氨基酸組成或序列都與陸地生物蛋白有很大的不同。因此，以海洋生物資源為原料，利用酶工程技術就可能開發出系列天然、高效、新穎的生物活性肽。

發明內容

本發明的目的是提供一種鯔魚魚鱗鐵螯合肽，該肽具有高的鐵螯合活性，將其用于補鐵保健品，可大大提高人體對鐵離子的吸收。

本發明的另一目的是提供一種鯔魚魚鱗鐵螯合肽的制備方法，該方法條件溫和，鐵螯合肽的提取率高，純度大，生物活性好，使鯔魚魚鱗變廢為寶，具有良好的社會經濟效益。

具體而言，本發明一方面提供了一種鯔魚魚鱗鐵螯合肽，其氨基酸序列為：Gly-Met-Ala-Gln-Met-Ala-Gly-Pro-Pro-Gly-Glu，ESI/MS檢測分子量為974.12 Da。該肽具有高的鐵螯合活性，與鐵所生成的螯合物分子量小，能夠順利通過腸黏膜，大大提高了人體對鐵離子的吸收。

在本發明的另一方面，還提供了一種鯔魚魚鱗鐵螯合肽的制備方法，包括以下步驟：

鯔魚魚鱗的預處理：取鯔魚魚鱗，加入NaOH溶液脫除非膠原蛋白，再加入EDTA溶液，經浸泡、干燥得脫鈣魚鱗，該條件下，魚鱗中非膠原蛋白和鈣的去除率高，減少了產品鐵螯合肽的灰分含量，提高了鐵螯合肽的純度，降低了產品的苦味和腥味；

鯔魚魚鱗膠原蛋白的制備：按照料液比1g:5～8mL向脫鈣魚鱗中加入0.5mol/L乙酸溶液并在4℃下浸泡3～5d，12000g離心20～25min后取上清液，加入NaCl至溶液終濃度為0.8～1.0mol/L，靜置61～90min，15000g離心15～20 min得沉淀物，冷凍干燥即為鯔魚魚鱗膠原蛋白，提取條件溫和，不會破壞膠原蛋白的結構，提高了制備的膠原蛋白的生物活性；

鯔魚魚鱗的酶解：按照料液比1g:15～20mL向膠原蛋白中加入超純水，用鹽酸調溶液pH到2.0～2.5，按照膠原蛋白質量的0.8%～1.2%向溶液中加入胃蛋白酶（酶活力≥1.6×10⁵ U/g），酶解3～5h后，將溶液升溫至90℃～95℃，并于此溫度保持10～15min后，冷卻至室溫；用NaOH調溶液pH到9～10，按照蛋白質量的1.0%～1.5%向溶液中加入堿性蛋白酶（2.0×10⁵ U/g），45～55℃酶解3～4h，得酶解產物，該條件下，酶的利用度高，單位酶產肽量大，產物的抑制效應小，大大提高了產品中鐵螯合肽的提取率；

鯔魚魚鱗鐵螯合肽的制備：將制備的蛋白酶解產物采用3kDa超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于3kDa部分，得超濾酶解液，超濾酶解液按照體積比加入到裝有8～10倍AB-8大孔樹脂的層析柱中，用5～8倍柱體積水洗脫除去雜質，然后用3～5倍柱體積的60%乙醇進行洗脫，乙醇洗脫液于50℃以下低壓旋蒸除去乙醇、冷凍干燥得膠原肽混合物，膠原肽混合物依次經凝膠柱層析和反相高效液相色譜（RP-HPLC）純化，得到鯔魚魚鱗鐵螯合肽，該條件下，所獲得的鐵螯合肽純度高，品質好，為鐵螯合肽的應用研究提供了良好的條件。