[發明專利]一種通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β?谷甾醇的方法

在審

• 申請號: 201711316125.5
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN107782828A
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發明（設計）人: 常明;馮文歡;王興國;金青哲;劉睿杰;吳正章;張鵬
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/34
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙)32272
• 代理人: 王曉東

技術領域

本發明屬于植物甾醇的分離技術領域，具體涉及一種通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法。

背景技術

植物甾醇是一種以環戊烷全氫菲為基本骨架的天然活性化合物，C-3位上連有羥基，C-17位上連有8～10個碳原子構成側鏈的甾族化合物，屬于脂質中的不皂化物，其中菜油甾醇(Campesterol)、豆甾醇(Stigmasterol)和β-谷甾醇(Sitosterol)是植物甾醇中含量最高的甾醇單體，其結構同時見圖1。植物甾醇具有降低膽固醇和心血管疾病風險、抗癌、抗炎和抗氧化等生理功能，在醫藥、食品、化妝品等領域越來越受到重視，截止2015年全球甾醇的需求量高達1.8萬噸左右。目前，植物甾醇主要從植物油脫臭餾出物和妥爾油中分離純化獲得。因此，建立一種靈敏準確、快捷簡便的檢測方法，以此測定植物甾醇的含量對分析此類活性物質具有重要意義。

由于菜油甾醇和豆甾醇僅在C-22位和C-24位上存在結構差異，兩者之間產生的極性中和效應會使菜油甾醇和豆甾醇在色譜分離過程中出現共洗脫現象，目前國內外研究大多針對其中的一種或兩種甾醇進行同時分離測定，未見對三種甾醇同時進行分離測定研究。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

鑒于上述和/或現有通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的技術空白，提出了本發明。

因此，本發明的目的是解決現有技術中的不足，提供一種通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，包括，標準溶液的配制，采用極性溶劑配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇混合標準儲備液，經處理后，再用極性溶劑分別配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合標準系列溶液；色譜條件，色譜柱為C18色譜柱，檢測波長為200～220nm，柱溫為25～45℃，流速為0.5～1.5mL/min。

作為本發明所述通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一種優選方案，其中：所述采用極性溶劑配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇混合標準儲備液，其中，所述極性溶劑包括甲醇。

作為本發明所述通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一種優選方案，其中：所述經處理后，其是用氮吹儀將所述混合標準儲備液中的甲醇吹干。

作為本發明所述通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一種優選方案，其中：所述再用極性溶劑分別配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合標準系列溶液，其中，所述極性溶劑包括乙腈。

作為本發明所述通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一種優選方案，其中：所述分別配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合標準系列溶液，其是，配制含菜油甾醇2.5、5、10、20、40、50μg/mL的混合標準系列溶液，配制含豆甾醇5、10、20、40、80、100μg/mL的混合標準系列溶液，配制含β-谷甾醇5、10、20、40、80、100μg/mL的混合標準系列溶液。

作為本發明所述通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一種優選方案，其中：所述色譜條件，其中，流動相包括100％乙腈、100％甲醇、乙腈:水＝85:5～99:1(v/v)或甲醇:水＝85:5～99:1(v/v)。

作為本發明所述通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一種優選方案，其中：所述色譜條件，其中，流動相包括100％乙腈或乙腈:水＝85:5～99:1(v/v)。

作為本發明所述通過高效液相色譜法分離測定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法的一種優選方案，其中：所述色譜條件，其中，進樣量為10～60μL。

本發明所具有的有益效果：

我方發明，不僅使3種甾醇單體達到基線分離，大大縮短了保留時間，最終確定了最優的色譜條件為1.0mL/min，檢測波長208nm，柱溫35℃，且該方法精密度和加樣回收率均較高，能夠滿足準確定量3種甾醇單體含量的檢測要求。

附圖說明