[發(fā)明專利]一種蜜蜂球囊菌發(fā)酵生產(chǎn)葡甘聚糖酶的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711315496.1
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN108060148B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邱君志;睢珺文;薛青霖;牛亞靜;楊芳;謝勇嘯;陳宇熹;魏秀艷;涂新亞;姚靈丹
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

本發(fā)明屬于真菌發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蜜蜂球囊菌發(fā)酵產(chǎn)葡甘聚糖酶的方法，具體通過將發(fā)酵種子液接種于培養(yǎng)基，培養(yǎng)基原料含有L?阿拉伯糖3~24g/L，酵母浸粉5.5~44g/L，Mn²⁺ 0.03~1.92 mol/L，煙酸0.005~0.04g/L，控制pH 7.1~7.7，在250 mL的三角瓶裝液量為50 mL，接種量5%，于30℃，轉(zhuǎn)速150 r/min下培養(yǎng)。本發(fā)明的發(fā)酵方法發(fā)酵周期短；條件溫和，易于控制；提供的用于蜜蜂球囊菌發(fā)酵生產(chǎn)葡甘聚糖酶的培養(yǎng)基，具有葡甘聚糖酶產(chǎn)率高，葡甘聚糖酶活力高等優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及真菌的發(fā)酵培養(yǎng)基及工藝，具體涉及一種蜂球囊菌發(fā)酵產(chǎn)葡甘聚糖酶的培養(yǎng)基及方法。

背景技術(shù)

蜜蜂球囊菌隸屬于子囊菌亞門、不整子囊菌綱、球囊菌目、球囊霉屬的一個種。此菌是蜜蜂白堊病的病原，是影響我國養(yǎng)蜂業(yè)發(fā)展的潛在病害之一。本發(fā)明就是希望從葡甘聚糖酶上分析蜜蜂球囊菌，提高葡甘聚糖酶的產(chǎn)量。

葡甘聚糖酶是一種能將葡甘聚糖降解為葡甘低聚糖的可誘導(dǎo)細(xì)胞外泌酶(董桂清，廣西輕工業(yè)，2007)。葡甘聚糖由甘露糖和葡萄糖單元按1.6∶1.0的摩爾比通過β-1，4-糖苷鍵相連的天然多糖高分子。目前在真菌、細(xì)菌中都有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)葡甘聚糖酶的菌株，葡甘聚糖酶的應(yīng)用將會對傳統(tǒng)的食品、醫(yī)藥行業(yè)等有深遠(yuǎn)的影響。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于提供一種蜜蜂球囊菌發(fā)酵產(chǎn)葡甘聚糖酶的培養(yǎng)基，具有葡甘聚糖酶產(chǎn)率高，葡甘聚糖酶活力高等優(yōu)點。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種蜜蜂球囊菌發(fā)酵生產(chǎn)葡甘聚糖酶的培養(yǎng)基的原料含有L-阿拉伯糖24g/L，酵母浸粉22g/L，Mn²⁺1.92mol/L，煙酸0.005g/L，培養(yǎng)基pH為7.1。

一種蜜蜂球囊菌發(fā)酵生產(chǎn)葡甘聚糖酶的方法包括以下步驟：

(a)將蜜蜂球囊菌按照10％接種至種子培養(yǎng)基，制得發(fā)酵種子液；

(b)將步驟(a)中制得的發(fā)酵種子液接種于蜜蜂球囊菌發(fā)酵生產(chǎn)葡甘聚糖酶的培養(yǎng)基，250mL的三角瓶裝液量為50mL，接種量5％，于30℃，轉(zhuǎn)速150r/min下培養(yǎng)9h。

所述的種子培養(yǎng)基的原料為：將200g土豆加水750mL熬汁，加20g葡萄糖，稀釋至1000mL。

采用本發(fā)明優(yōu)化后的培養(yǎng)基，菌齡1d，發(fā)酵周期9h，蜜蜂球囊菌發(fā)酵生產(chǎn)葡甘聚糖酶，得到酶為969.59U/mL。

本發(fā)明的顯著優(yōu)點在于：本發(fā)明的發(fā)酵方法發(fā)酵周期短；條件溫和，易于控制；提供的用于蜜蜂球囊菌發(fā)酵生產(chǎn)葡甘聚糖酶的培養(yǎng)基，具有葡甘聚糖酶產(chǎn)率高，葡甘聚糖酶活力高等優(yōu)點。

附圖說明

圖1為甘露糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。

具體實施方式

本發(fā)明用下列實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于下列實施例。

實施例1

單因素實驗確定培養(yǎng)基最優(yōu)成分

(1)種子培養(yǎng)基配制：去皮馬鈴薯200g，加水750mL熬汁過濾(八層紗布)，加入葡萄糖20g，再稀釋至1000mL，分裝于250mL的三角瓶中，每個三角瓶含100mL。121℃，滅菌20min。

(2)發(fā)酵種子的制作：將蜜蜂球囊菌接種于馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基上，于30℃下培養(yǎng)7d，待其產(chǎn)孢子，即活化；將活化后的菌株切塊，大小為0.5×0.5cm，5塊放入種子培養(yǎng)基，30℃，轉(zhuǎn)速150r/min下培養(yǎng)24h，即為發(fā)酵液。