[發明專利]一種模擬生物應激反應誘導銀杏快速積累銀杏內酯的方法

在審

• 申請號: 201711312989.X
• 申請日: 2017-12-06
• 公開（公告）號: CN108012698A
• 公開（公告）日: 2018-05-11
• 發明（設計）人: 陸續;李萍;林廷文;鄭曉燕
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06;A01N37/42;A01P21/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種模擬生物應激反應誘導銀杏快速積累銀杏內酯的方法，屬于生物技術和植物學技術領域。通過模擬自然生長條件培養銀杏植株，使用植物激素茉莉酸甲酯(MeJA)誘導，并采用高效液相色譜?蒸發光散射法檢測分析銀杏內酯的積累動態變化情況。探尋不同誘導濃度及時間條件下，銀杏內酯含量的變化情況，從而確定MeJA的濃度、誘導時間，從而篩選出MeJA誘導快速積累銀杏內酯的最佳誘導條件，為提高銀杏內酯產量提供切實有效的依據，為銀杏葉采收前處理提供科學依據。

技術領域

本發明涉及一種采用模擬生物應激反應誘導銀杏快速累積銀杏內酯的方法，屬于生物技術和植物學技術領域。

背景技術

銀杏(Ginkgo biloba L)是銀杏科銀杏屬的多年生裸子植物，是具有“活化石”之稱的現存最古老的樹種之一，銀杏在傳統中藥中主要以種子白果入藥。近現代以來，銀杏葉提取物以及銀杏內酯使用價值逐漸被開發利用，而今作為植物藥銀杏葉提取物已經在國內外廣泛銷售，具有改善記憶，增加血液循環，以及治療阿爾茨海默病等功效。

銀杏內酯(ginkgolides)是銀杏葉中特有的萜類活性成分，包括二萜內酯類的銀杏內酯A、B、C、J、K、L、M和倍半萜內酯白果內酯(bilobalide)。銀杏內酯具有清除自由基及抑制細胞膜脂質過氧化，防止血管內皮細胞和腦細胞受損；擴張血管，增加血流量，降低心腦血管的阻力；抗血小板聚集，降低血液黏度，降血脂、抗動脈粥樣硬化，改善心腦循環和代謝等藥理作用(參見文獻王雁，楊義芳.銀杏葉的藥理作用及其機制的研究進展[J].中國現代應用藥學，2001，18(1)：1-3.劉彬果，張新萍，劉巖.銀杏葉中萜內酯類化合物的研究進展[J].藥學實踐雜志，2011，29(6)：421-425)。并且，在銀杏內酯中以銀杏內酯A、B、C及白果內酯(結構如圖1)含量最多，藥效明顯，藥用需求量大，尤其是在心腦血管疾病的治療方面具有獨特的優勢，因此市場需求量大。

目前，市場上的銀杏內酯主要來源于銀杏葉提取，然而銀杏葉中銀杏內酯的含量很低，這使銀杏內酯大規模商業化生產受限制。由于銀杏內酯結構較復雜，化學合成成本極高，而銀杏為裸子喬木，采用水培、組織培養，毛狀根培養，轉基因毛狀根培養等現代化快速繁殖方法受到限制，并且銀杏內酯合成通路尚不清晰，因此利用合成生物學方法發酵生產銀杏內酯暫時也不具備可行性。

本專利中用植物激素茉莉酸甲酯(MeJA)刺激銀杏植株使其有效萜類物質銀杏內酯迅速積累，從而提高其產量。該方法是在傳統銀杏人工栽培采收工序上配合增加MeJA誘導，步驟簡單，方法易行，可操作性強，不需要復雜的技術條件以及專業設備，只要確定合適的濃度和處理時間即可，栽培工作人員可以輕松掌握。而且經實例證明本專利所述方法能明顯快速累積銀杏內酯的含量。同時MeJA模擬生物應激反應誘導次級代謝產物銀杏內酯生產，天然綠色，對環境以及植株無傷害作用。

因此，利用MeJA誘導銀杏合成銀杏內酯等萜類化合物的方法對銀杏內酯產量的提高具有極大的實際應用價值。

目前，尚無文獻報道人工栽培結合MeJA誘導銀杏快速累積銀杏內酯的方法。

發明內容

本發明的目的旨在提供一種將人工栽培與MeJA模擬生物應激反應誘導相結合的銀杏栽培及處理方法，促進銀杏葉中銀杏內酯的快速積累，提高栽培藥用銀杏葉中銀杏內酯的含量。

本發明涉及應用于栽培銀杏的MeJA模擬生物應激反應誘導方法，包括誘導濃度及誘導后采收時間的確定，同時為提高銀杏內酯產量提供有效實用依據，對銀杏葉采收前處理提供科學依據。

本發明是由以下步驟組成：

(1)MeJA溶液的配置

將MeJA(純度為95％)先溶解于0.5ml的乙醇中，之后溶解于400ml純水中，分別配制成濃度為0、100、200、400、600、800μmol/L的MeJA水溶液。

(2)銀杏幼苗MeJA的誘導