[發(fā)明專利]一種從亞肉座菌中提取6;8-二羥基-3-羥甲基異香豆素的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711312214.2
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN108070626A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發(fā)明（設計）人: 邱君志;睢珺文;薛青霖;牛亞靜;楊芳;謝勇嘯;陳宇熹;魏秀艷;涂新亞;姚靈丹
• 申請（專利權）人: 福建農(nóng)林大學
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;C07D311/76;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發(fā)明提供了一種從亞肉座菌中提取6,8?二羥基?3?羥甲基異香豆素的方法，包括：1)活化菌株；2)初級培養(yǎng)；3)大米發(fā)酵；4)用乙酸乙酯浸泡提??；5)將浸出液旋轉(zhuǎn)濃縮，拌樣，進行200~300目硅膠柱層析，旋蒸濃縮，甲醇洗出，自然揮干；6)液相制備，經(jīng)NMR、EI?MS譜圖分析得到6,8?二羥基?3?羥甲基異香豆素。本發(fā)明以繁殖快、周期短的真菌為材料，成本低，操作簡單，重復性好，不需要復雜設備和通過簡單的方式即可制得純的物質(zhì)。

技術領域

本發(fā)明涉及從亞肉座菌中提取6,8-二羥基-3-羥甲基異香豆素的方法。

背景技術

亞肉座菌是狹義座殼孢菌的有性型，隸屬子囊菌門(Ascomycota)、糞菌綱(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、麥角菌科(Clavicipitaceae)，常見于熱帶地區(qū)，特別是在原始森林中，是一類常見的重要昆蟲病原真菌，主要通過侵染介殼蟲（Lecaniidae與Coccidae）和粉虱（Aleyrodidae）起到了控制害蟲種群數(shù)量的重要目的，從而表現(xiàn)出顯著的生物防治前景。另外其代謝產(chǎn)物具有較好的抗菌、殺瘧原蟲活性，并對昆蟲細胞和腫瘤細胞有較強的毒性，對哺乳動物細胞卻幾乎無毒。

在現(xiàn)今社會，各種疾病橫行。6,8-二羥基-3-羥甲基異香豆素已知具有中等的抗皰疹病毒和結(jié)核分枝桿菌的作用，IC50分別為50μg/mL和25μg/mL，表現(xiàn)出了潛在的醫(yī)藥作用（Kornsakulkarn J, Thongpanchang C, Lapanun S, Srichomthong K. Isocoumaringlucosides from the scale insect fungus Torrubiella tenuis BCC 12732. Journalof Natural Products, 2009, 72(7): 1341-1343.；Zhou M, Lou J, Li YK, Wang Y,Zhou K, Ji BK, Dong W, Gao XM, Du G, Hu QF. Versicolols A and B, two newprenylated isocoumarins from endophytic fungus Aspergillus versicolor andtheir cytotoxic activity. Archives of Pharmacal Research, 2015: 1-5.）。尋找不同來源的有效抗癌藥物早已備受關注，蟲生真菌的代謝物中含有多肽、生物堿、萜類化合物、甾醇等多種殺蟲、抗腫瘤、抗炎、抗菌的物質(zhì)。因此，對蟲生真菌的充分開發(fā)利用，將有利于人類醫(yī)療水平的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供從亞肉座菌中提取6,8-二羥基-3-羥甲基異香豆素的方法，以促進其作為先導化合物的開發(fā)和應用。

本發(fā)明采取的技術方案如下：

從亞肉座菌中提取6,8-二羥基-3-羥甲基異香豆素的方法，包括以下步驟：

1）將亞肉座菌活化后，取菌塊接種PDB培養(yǎng)基中，在125r/min、25℃條件下連續(xù)培養(yǎng)7天即種子培養(yǎng)，按10％接種量再次轉(zhuǎn)接到PDB培養(yǎng)基中，繼續(xù)在125r/min、25℃條件下連續(xù)培養(yǎng)14天即初級培養(yǎng)，第三次按10%的接種量轉(zhuǎn)接于大米培養(yǎng)基上，靜置培養(yǎng)30天。

2）用乙酸乙酯反復浸泡培養(yǎng)基，超聲，重復3-5次。合并浸泡液，旋蒸得菌初提浸膏。