[發明專利]一種用于酶聯免疫檢測的抗體稀釋液及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711310150.2
• 申請日: 2017-12-11
• 公開（公告）號: CN108037283B
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發明（設計）人: 陳善真;李其昌;陳克宏;楊潔;劉博奇;王貴平
• 申請（專利權）人: 廣東海大畜牧獸醫研究院有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/535;G01N33/53
• 代理公司: 廣州市合本知識產權代理事務所(普通合伙) 44421
• 代理人: 林玲

本發明公開了一種用于酶聯免疫檢測的抗體稀釋液，其包含以質量分數計的以下組分：75～95％作為溶劑體系的1×PBS緩沖液、0.1～8％的牛血清白蛋白(BSA)、0.01～0.5％的硫柳汞鈉、0.05～5％的抗凝劑、0.1～15％的非常規性飼養動物血清以及0.05～2％的青鏈霉素雙抗。本發明還公開了抗體稀釋液的制備方法和應用。本發明可以降低普通酶聯免疫檢測方法的結果背景、提高酶聯免疫檢測的靈敏度和穩定性。

技術領域

本發明涉及生物檢測試劑技術領域，更具體地說，涉及一種用于酶聯免疫檢測的抗體稀釋液及其制備方法和應用。

背景技術

酶聯免疫檢測試劑盒(ELISA試劑盒)是酶免疫測定技術中應用最廣的檢測技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應板)表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。酶聯免疫檢測試劑盒通常包括包被液、洗滌液、抗體稀釋液、終止液等在檢測過程中所使用的試劑。

研究表明，抗體稀釋液的配方對ELISA方法的檢測背景及試劑盒的穩定性起關鍵作用。在定性ELISA檢測中，影響檢測靈敏度的最主要因素是信噪比，即方法中陽性對照與陰性對照的比值。為了提高靈敏度，可以通過增強抗原與抗體結合能力，對信號進行放大，對背景(噪音)進行降低等方法。但由于抗體與抗原結合的能力往往在抗體生產出來后就已經確定，所以提高靈敏度的主要手段是放大信號以及降低背景。

現有酶聯免疫檢測方法中存在檢測背景偏高，試劑盒質控樣本穩定性欠佳以及建立檢測方法的敏感性過低等問題。要解決這些問題，可以一方面從抗原抗體的制備角度入手，另一方面就是研發一種可降低檢測方法信噪比的抗體稀釋液入手。目前常用的抗體稀釋劑中為抗體提供營養的成分多采用胎牛血清。由于抗體稀釋液常用于豬、雞、鼠、牛等相關抗原、抗體或細胞因子等的檢測試劑盒中，豬、雞、牛、兔的飼料中經常含有動物源性蛋白，而他們的飼養環境也容易出現交叉，若采用含有上述動物來源血清的抗體稀釋液容易增加檢測方法的交叉反應。

發明內容

針對現有技術的上述缺陷，本發明的目的在于提供一種用于酶聯免疫檢測的抗體稀釋液，以降低普通酶聯免疫檢測方法的結果背景、提高酶聯免疫檢測的靈敏度和穩定性。

本發明的另一目的在于提供一種用于酶聯免疫檢測的抗體稀釋液的制備方法，通過該方法獲得一種可以降低普通酶聯免疫檢測方法的結果背景、提高酶聯免疫檢測的靈敏度和穩定性酶聯免疫檢測試劑盒的抗體稀釋液。

本發明的第三個目的在提供一種用于酶聯免疫檢測的抗體稀釋液在酶聯免疫檢測試劑盒中的應用。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案如下：

一種用于酶聯免疫檢測的抗體稀釋液，其包含以質量分數計的以下組分：75～95％作為溶劑體系的1×PBS緩沖液、0.1～8％的牛血清白蛋白(BSA)、0.01～0.5％的硫柳汞鈉、0.05～5％的肝素或乙二胺四乙酸二鈉(EDTA·2Na)中的一種、0.1～15％的非常規性飼養動物血清以及0.05～2％的青鏈霉素雙抗。

作為進一步的方案，本發明所述的用于酶聯免疫檢測的抗體稀釋液包含以質量分數計的以下組分：85～92％作為溶劑體系的1×PBS緩沖液、0.1～5％的牛血清白蛋白(BSA)、0.1～0.3％的硫柳汞鈉、0.1～2％的抗凝劑、3～8％的非常規性飼養動物血清以及0.1～1％的青鏈霉素雙抗。

作為進一步的方案，本發明所述的用于酶聯免疫檢測的抗體稀釋液包含以質量分數計的以下組分：91％作為溶劑體系的pH7.2的1×PBS緩沖液、2.0％的牛血清白蛋白(BSA)、0.2％的硫柳汞鈉、1.0％的抗凝劑、5.0％的非常規性飼養動物血清以及0.8％的青鏈霉素雙抗。

作為進一步的方案，本發明所述的抗凝劑為肝素或乙二胺四乙酸二鈉；所述非常規性飼養動物血清為駱駝、駝鹿、羊駝、馬、鴕鳥、鴿、牦牛等動物血清中的一種或兩種混合。