[發明專利]一種小麥赤霉病輕簡化接種方法

在審

• 申請號: 201711308465.3
• 申請日: 2017-12-11
• 公開（公告）號: CN108060087A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: 張敏;何露;梁銀萍;楊繼芝;常小麗;龔國淑;陳華保;尚靜;胡玉婷;李濤
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京遠創理想知識產權代理事務所(普通合伙) 11513
• 代理人: 衛安樂

1.一種小麥赤霉病輕簡化接種方法，其特征在于：包括下述步驟：

(1)配制PDA培養基；

(2)配置小麥赤霉病菌孢子懸浮液：采用綠豆培養基制作小麥赤霉病孢子懸浮液，獲得光學顯微鏡10×10倍鏡每個視野下20-30個孢子的孢子懸浮液；

(3)制備帶菌牙簽：將長度一致的牙簽進行滅菌后，在無菌條件下，用牙簽蘸取步驟(2)中配置好的小麥赤霉病菌孢子懸浮液后轉入步驟(1)中配置的PDA培養基上，在20℃-30℃恒溫培養箱中培養4.5d-5.5d；

(4)赤霉病菌的接種與套袋：在小麥有40％-60％麥穗楊花時，選取長勢良好的同一品種的小麥植株標記掛牌，以步驟(3)中制備的帶菌牙簽進行牙簽接種、套袋，牙簽接種至少設10個重復；

(5)觀察、記錄與統計：在接種后第21天時，調查統計標記小麥穗的總小穗數、發病小穗數，并計算出病小穗率。

2.根據權利要求1所述的小麥赤霉病輕簡化接種方法，其特征在于：所述步驟(1)中的PDA培養基的制備方法為：稱取馬鈴薯，將其去皮后切成小塊，然后加蒸餾水進行水煮，待馬鈴薯煮軟后，采用6層紗布過濾；然后加入葡萄糖和瓊脂粉，所述馬鈴薯、葡萄糖和瓊脂粉之間的質量比為：18-22：2：1；化開后加蒸餾水定容，在溫度為115℃-125℃進行濕熱滅菌25min-35min。

3.根據權利要求2所述的小麥赤霉病輕簡化接種方法，其特征在于：所述馬鈴薯、葡萄糖和瓊脂粉之間的質量比為：20：2：1。

4.根據權利要求1-3中任意一項所述的小麥赤霉病輕簡化接種方法，其特征在于：所述步驟(2)中，配置小麥赤霉病菌孢子懸浮液包括下述步驟：

①制備綠豆培養基：將綠豆加入蒸餾水煮28min-35min后定容，綠豆和定容體積之間的質量(g)：體積比(L)為30：1，過濾后分裝至錐形瓶中，進行滅菌；

②在無菌條件下，接入小麥赤霉病菌菌餅，在溫度為25℃-30℃、100r/min-200r/min的搖床中培養2.5d-3.5d，然后用紗布過濾菌絲，獲得高濃度小麥赤霉病菌孢子懸浮液；

③在無菌條件中用顯微鏡觀察步驟②中高濃度小麥赤霉病菌孢子懸浮液，并通過不斷稀釋獲得光學顯微鏡10×10倍鏡每個視野下20-30個孢子的孢子懸浮液。

5.根據權利要求4所述的小麥赤霉病輕簡化接種方法，其特征在于：所述步驟(3)中的牙簽在蘸取步驟(2)中配置好的小麥赤霉病菌孢子懸浮液之前，需要將牙簽截斷為2cm長，在121℃溫度下進行濕熱滅菌30min。

6.根據權利要求5所述的小麥赤霉病輕簡化接種方法，其特征在于：所述步驟(3)中，用牙簽蘸取步驟(2)中配置好的小麥赤霉病菌孢子懸浮液后轉入步驟(1)中配置的PDA培養基上后，是在25℃恒溫培養箱中培養5d。

7.根據權利要求6所述的小麥赤霉病輕簡化接種方法，其特征在于：所述步驟(4)中，是在小麥有50％麥穗楊花時，選取長勢良好的同一品種的小麥植株標記掛牌。

8.根據權利要求7所述的小麥赤霉病輕簡化接種方法，其特征在于：所述步驟(4)中，牙簽接種方法設20個重復。

9.根據權利要求8所述的小麥赤霉病輕簡化接種方法，其特征在于：所述步驟(4)中，牙簽接種方法接種套袋是采用寬16cm×長20cm的透明食品袋。