[發(fā)明專(zhuān)利]二化螟盤(pán)絨繭蜂毒腺和卵巢分泌的鈣網(wǎng)蛋白CcCRT及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711305075.0
• 申請(qǐng)日: 2017-12-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107987143B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 葉恭銀;滕子文;熊時(shí)姣;方琦
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/435
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/435;C12N15/12
• 代理公司: 杭州中成專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)、基因工程以及蛋白工程領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明公開(kāi)了一種二化螟盤(pán)絨繭蜂毒腺和卵巢分泌的鈣網(wǎng)蛋白CcCRT，其氨基酸序列為SEQ ID NO：2所示。本發(fā)明還同時(shí)公開(kāi)了編碼上述二化螟盤(pán)絨繭蜂毒腺和卵巢分泌的鈣網(wǎng)蛋白CcCRT的基因，其核苷酸序列為SEQ ID NO：1所述；或者與SEQ ID NO：1中的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者其核苷酸序列能在40～55℃條件下與SEQ ID NO：1中的核苷酸序列雜交。本發(fā)明的蛋白可以進(jìn)入水稻重要害蟲(chóng)二化螟幼蟲(chóng)的重要免疫相關(guān)細(xì)胞——顆粒血細(xì)胞中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)、基因工程以及蛋白工程領(lǐng)域。特別是一種在二化螟盤(pán)絨繭蜂毒腺和卵巢分泌的鈣網(wǎng)蛋白CcCRT及其編碼的核酸序列及應(yīng)用。

背景技術(shù)

農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)是農(nóng)業(yè)增產(chǎn)和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量提高的重要制約因素，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)每年因病蟲(chóng)害損失的糧食近500億斤，經(jīng)濟(jì)作物損失達(dá)350多億斤。長(zhǎng)久以來(lái)，化學(xué)農(nóng)藥的大量不合理使用導(dǎo)致農(nóng)藥殘留、害蟲(chóng)抗性以及再猖獗等問(wèn)題。自20世紀(jì)90年代中期以來(lái)，抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因作物培育與應(yīng)用取得成功，害蟲(chóng)防治迎來(lái)新的契機(jī)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球轉(zhuǎn)基因種植面積由1996年的約170萬(wàn)公頃猛增到2014年的1.8億公頃(其中抗蟲(chóng)的占43％)，產(chǎn)生了明顯的經(jīng)濟(jì)與生態(tài)效應(yīng)。然而，長(zhǎng)期單一種植Bt基因抗蟲(chóng)作物，靶標(biāo)害蟲(chóng)的抗性問(wèn)題也日益浮現(xiàn)。

因此，科研工作者也致力于從微生物、植物和動(dòng)物中挖掘新型殺蟲(chóng)蛋白/肽基因，通過(guò)多基因或融合基因等手段，培育新型抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因作物，以其解決上述農(nóng)藥和Bt作物帶來(lái)的問(wèn)題。寄生蜂是一類(lèi)重要的天敵昆蟲(chóng)，有著重要的生防價(jià)值。寄生蜂攜帶多種寄生因子，包括毒液(venom)、卵巢分泌蛋白(ovarian fluids)、多分DNA病毒(polydnavirus)、類(lèi)病毒顆粒(virus-like particle)、畸形細(xì)胞(teratocyte)等。這些寄生因子可以調(diào)節(jié)寄主免疫反應(yīng)、生長(zhǎng)發(fā)育等生理活動(dòng)。對(duì)于寄生蜂寄生因子的研究可以服務(wù)生產(chǎn)，開(kāi)辟害蟲(chóng)生物防治的新途徑。例如藏紅足側(cè)溝繭蜂(Microplitis croceipes)畸形細(xì)胞的分泌蛋白基因轉(zhuǎn)入煙草，可提高植株對(duì)煙草天蛾(Manduca sexta)的抗性等。

二化螟Chilo suppressalis，屬鱗翅目草螟科(Lepidoptera:Crambidae)，是我國(guó)水稻上的重要鉆蛀性害蟲(chóng)之一，可造成水稻枯心和白穗等。該蟲(chóng)分布廣，適應(yīng)性強(qiáng)。中國(guó)稻螟年發(fā)生面積1500萬(wàn)公頃以上，總經(jīng)濟(jì)損失約115億元。二化螟盤(pán)絨繭蜂(Cotesiachilonis)屬膜翅目繭蜂科(Hymenoptera:Braconidae)，主要分布于中國(guó)的貴州、江蘇、浙江、江西、湖南、四川、福建、廣東、廣西、云南和臺(tái)灣等地，也分布于印度尼西亞、日本和朝鮮等亞洲國(guó)家。該蜂是二化螟幼蟲(chóng)期優(yōu)勢(shì)多寄生性的內(nèi)寄生蜂，例如在江蘇越冬代寄生率可達(dá)90％，水稻生長(zhǎng)期其寄生率為10％-30％，該寄生蜂的寄生因子包括毒液、卵巢分泌蛋白和畸形細(xì)胞，對(duì)其寄生因子具體組分的研究和挖掘具有重要的生產(chǎn)實(shí)踐意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種可以進(jìn)入水稻重要害蟲(chóng)二化螟免疫相關(guān)細(xì)胞(顆粒血細(xì)胞)的二化螟盤(pán)絨繭蜂毒腺和卵巢分泌的鈣網(wǎng)蛋白基因CcCRT及其編碼的蛋白質(zhì)和用途。

為解決技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種二化螟盤(pán)絨繭蜂毒腺和卵巢分泌的鈣網(wǎng)蛋白CcCRT蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

備注說(shuō)明：SEQ ID NO：2包含了信號(hào)肽，為：M R A L V A I L A I A V I A T V SA。

作為本發(fā)明的二化螟盤(pán)絨繭蜂毒腺和卵巢分泌的鈣網(wǎng)蛋白CcCRT的改進(jìn)：該蛋白、其保守性變異蛋白、其活性片段或其活性衍生物。