[發(fā)明專利]二化螟盤絨繭蜂卵巢蛋白Crp32B及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711304368.7
• 申請日: 2017-12-11
• 公開（公告）號: CN107987142B
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發(fā)明（設計）人: 葉恭銀;滕子文;熊時姣;吳慧子;方琦
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發(fā)明涉及分子生物學、基因工程以及蛋白工程領域。具體而言，本發(fā)明公開了一種二化螟盤絨繭蜂卵巢蛋白Crp32B，其氨基酸序列為SEQ ID NO：2所述。本發(fā)明還同時公開了編碼上述二化螟盤絨繭蜂卵巢蛋白Crp32B的基因，其核苷酸序列為SEQ ID NO：1所述；或者與SEQ ID NO：1中的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者其核苷酸序列能在40～55℃條件下與SEQ ID NO：1中的核苷酸序列雜交。本發(fā)明的蛋白能用于調控寄主二化螟幼蟲血細胞的包囊反應。

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學、基因工程以及蛋白工程領域。特別是一種二化螟盤絨繭蜂卵巢蛋白Crp32B及應用。

背景技術

農業(yè)害蟲是農業(yè)增產和農產品質量提高的重要制約因素，據(jù)統(tǒng)計，我國每年因病蟲害損失的糧食近500億斤，經濟作物損失達350多億斤。長久以來，化學農藥的大量不合理使用導致農藥殘留、害蟲抗性以及再猖獗等問題。自20世紀90年代中期以來，抗蟲轉基因作物培育與應用取得成功，害蟲防治迎來新的契機。據(jù)統(tǒng)計，全球轉基因種植面積由1996年的約170萬公頃猛增到2014年的1.8億公頃(其中抗蟲的占43％)，產生了明顯的經濟與生態(tài)效應。然而，長期單一種植Bt基因抗蟲作物，靶標害蟲的抗性問題也日益浮現(xiàn)。

因此，科研工作者也致力于從微生物、植物和動物中挖掘新型殺蟲蛋白/肽基因，通過多基因或融合基因等手段，培育新型抗蟲轉基因作物，以其解決上述農藥和Bt作物帶來的問題。寄生蜂是一類重要的天敵昆蟲，有著重要的生防價值。寄生蜂攜帶多種寄生因子，包括毒液(venom)、卵巢分泌蛋白(ovarian fluids)、多分DNA病毒(polydnavirus)、類病毒顆粒(virus-like particle)、畸形細胞(teratocyte)等。這些寄生因子可以調節(jié)寄主免疫反應、生長發(fā)育等生理活動。對于寄生蜂寄生因子的研究可以服務生產，開辟害蟲生物防治的新途徑。例如藏紅足側溝繭蜂(Microplitis croceipes)畸形細胞的分泌蛋白基因轉入煙草，可提高植株對煙草天蛾(Manduca sexta)的抗性等。

二化螟Chilo suppressalis，屬鱗翅目草螟科(Lepidoptera:Crambidae)，是我國水稻上的重要鉆蛀性害蟲之一，可造成水稻枯心和白穗等。該蟲分布廣，適應性強。中國稻螟年發(fā)生面積1500萬公頃以上，總經濟損失約115億元。二化螟盤絨繭蜂(Cotesiachilonis)屬膜翅目繭蜂科(Hymenoptera:Braconidae)，主要分布于中國的貴州、江蘇、浙江、江西、湖南、四川、福建、廣東、廣西、云南和臺灣等地，也分布于印度尼西亞、日本和朝鮮等亞洲國家。該蜂是二化螟幼蟲期優(yōu)勢多寄生性的內寄生蜂，例如在江蘇越冬代寄生率可達90％，水稻生長期其寄生率為10％-30％，該寄生蜂的寄生因子包括毒液、卵巢分泌蛋白和畸形細胞，對其寄生因子具體組分的研究和挖掘具有重要的生產實踐意義。

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種對常見農業(yè)害蟲具有免疫調控作用(調控寄主血細胞包囊)的二化螟盤絨繭蜂卵巢蛋白基因Crp32B及其編碼的蛋白質和用途。

為解決技術問題，本發(fā)明提供了一種二化螟盤絨繭蜂卵巢蛋白Crp32B，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所述。

作為本發(fā)明的二化螟盤絨繭蜂卵巢蛋白Crp32B的改進：二化螟盤絨繭蜂卵巢蛋白Crp32B為該蛋白、其保守性變異蛋白、其活性片段或其活性衍生物。

本發(fā)明還同時提供了編碼上述二化螟盤絨繭蜂卵巢蛋白Crp32B的基因，其核苷酸序列為SEQ ID NO.1中的；或者與SEQ ID NO.1中的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者其核苷酸序列能在40～55℃條件下與SEQ ID NO.1中的核苷酸序列雜交。

作為本發(fā)明的基因的改進：序列中包含SEQ ID NO.1中8～66個連續(xù)核苷酸。