[發明專利]一種純化有機酸肽的方法

在審

• 申請號: 201711297988.2
• 申請日: 2017-12-08
• 公開（公告）號: CN108047301A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 林健勇;符友偉;葉燕軍;滕景斌;張娜;張會會;謝治平;張旭
• 申請（專利權）人: 福州博中技術開發有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/18;C07K1/20;C07K1/36
• 代理公司: 福州市博深專利事務所(普通合伙) 35214
• 代理人: 林志崢

本發明涉及一種純化多肽藥物的方法，特別涉及一種純化有機酸肽的方法。包括如下步驟：樹脂處理：將陰離子樹脂處理成有機酸根型的陰離子樹脂；轉鹽：將多肽粗品加水溶解，加入有機酸根型的陰離子樹脂，在溫度為20～30℃的條件下攪拌，控制溶液的pH為2～5.5，過濾收集濾液；純化：將轉鹽后收集的濾液經過反相色譜柱進行純化，分段收集洗脫液，進行濃縮凍干或直接凍干，得到粉末狀有機酸肽純品。本發明結合有機酸根型的陰離子交換樹脂和反相高效液相色譜，最終可獲得純度99％以上，收率為50％以上的有機酸肽。

技術領域

本發明屬于多肽純化的技術領域，特別是涉及一種純化有機酸肽的方法。

背景技術

全球多肽藥物的研發已廣泛涉足疫苗、抗腫瘤藥物、心腦血管藥物、抗病毒多肽以及抗菌活性肽、診斷試劑盒的研究。多肽藥物的制備主要通過人工合成，其中Fmoc法是在Boc法的基礎上發展起來的一種多肽固相合成的新方法，該法具有反應條件溫和、副反應少、產率高、易于檢測控制反應等優點，成為合成多肽的常用方法。但該法合成的多數肽是在TFA體系下分離純化的，獲得的粗品中會含有游離的TFA和TFA鹽，游離的TFA和TFA鹽會影響多肽的理化性質，雖然游離的TFA通過凍干容易除去，但與肽形成的TFA鹽，因存在強的離子鍵，難以通過凍干除去。

目前主要通過離子交換法和反相色譜法實現多肽轉鹽。此法下獲得的多肽鹽包括藥學上可用的鹽(如醋酸鹽)和其他有機酸鹽。為了進一步得到純度高的多肽產品，通常采用反相高效液相色譜，根據多肽及其類似物的親疏水性差別，實現它們的分離。現在世界主要的化學合成多肽公司，如Bachem公司，Novabiochem公司、American Peptide公司等，其最主要制備分離純化的方法還是依賴于反相高效液相色譜。

申請號為201110073257.6的發明專利公開了一種戈舍瑞林多肽的純化方法，經Source柱和反相色譜柱進行梯度洗脫純化，得到較高純度的戈舍瑞林三氟乙酸鹽，然后采用陰離子交換轉鹽法轉成醋酸鹽，最終獲得純度達98％以上，收率40-46％的純品醋酸肽，純化效率和收率都不理想，且已發表的文獻和專利中，沒有出現規模化生產具有高收率的純化有機酸肽的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種簡單、節約成本、純化效率高的純化有機酸肽的方法。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：一種純化有機酸肽的方法，包括如下步驟：

步驟1、樹脂處理：陰離子樹脂處理成有機酸根型的陰離子樹脂；

步驟2、轉鹽：將多肽粗品加水溶解，加入步驟1的有機酸根型的陰離子樹脂，在溫度為20～30℃的條件下攪拌，控制溶液的pH為2～5.5，過濾收集濾液；

步驟3、純化：反相色譜柱用流動相平衡，所述流動相由流動相A和流動相B組成，所述流動相A為水和質量分數為0.05％～1％的有機酸的混合溶液，所述流動相B為乙腈和質量分數為0.05％～1％的有機酸的混合溶液，將步驟2所得的濾液上樣，進行洗脫，分段收集洗脫液，將洗脫液濃縮后凍干或直接凍干，獲得粉末狀有機酸肽純品。

本發明的有益效果在于：本發明先采用有機酸根型的陰離子交換樹脂將多肽粗品轉有機酸鹽，再進行反相高效液相色譜純化，能減少有機酸根型的陰離子交換樹脂的使用量，減少生產成本；本發明結合有機酸根型的陰離子交換樹脂和反相高效液相色譜純化可獲得純化高達99％以上，收率為50％以上的有機酸肽，不僅操作更簡單，縮短制備時間、原材料便宜易得、價格成本更低，而且不存在大量使用流動相的問題，減少對環境污染，更適合規模化純化有機酸肽的工藝方法，達到產業化要求。

附圖說明

圖1為本發明具體實施方式中實施例1的甲酸愛啡肽純品純度的HPLC圖；

圖2為本發明具體實施方式中實施例2的蘋果酸奧曲肽純品純度的HPLC圖；