[發明專利]一種多肽抗原檢測豬旋毛蟲抗體的試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201711297851.7
• 申請日: 2017-12-08
• 公開（公告）號: CN108088988B
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發明（設計）人: 張念章;付寶權;李文卉;蓋文燕
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 席勇

本發明公開了一種多肽抗原檢測豬旋毛蟲抗體的試劑盒及其檢測方法，所述試劑盒包括多肽抗原、包被液、多肽抗原包被的酶標板、抗體稀釋液、PBST洗滌液、陽性血清、陰性血清、封閉液、用辣根過氧化物酶標記的兔抗豬IgG二抗、底物顯色液TMB、終止液，所述特異性多肽抗原為：TEp1，序列為：SWDEVFDEAHTKRKKGGGGSGGGGSFDE AHTKRKKFYPTPGGGGSGGGGTKRKKFYPTPHSSIKGQGQGQGFYPTPHSSIKIPMMT。本發明設計的多肽抗原檢測豬旋毛蟲抗體的試劑盒，其操作方法簡單，檢測速度快，利用TEp1多肽抗原作為包被抗原，與目標抗體的結合效率高，特異性好，TEp1多肽抗原制備方法和成分簡單，降低了豬旋毛蟲檢測的成本。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，尤其涉及一種多肽抗原檢測豬旋毛蟲抗體的試劑盒及其檢測方法。

背景技術

豬旋毛蟲病診斷方法主要包括鏡檢法、集樣消化法和基于旋毛蟲ES抗原的間接ELISA。肌肉消化法是OIE規定的檢測豬旋毛蟲病的金標準，但操作費時費力且敏感性差，只適合用于實驗室檢測。間接ELISA檢測方法是目前最為敏感的免疫學檢測方法，但由于采用的旋毛蟲ES抗原制備困難，增加了旋毛蟲檢測的成本。且由于ES抗原成分復雜，特異性不強，因此，篩選特異性及敏感性的抗原以建立快速及特異檢測方法、減小抗原制備難度、降低豬旋毛蟲檢測成本等已成為國內外眾多學者的研究焦點。

發明內容

為克服現有技術的缺陷，本發明的目的在于提供一種特異性強的多肽抗原檢測豬旋毛蟲抗體的試劑盒及其檢測方法。

本發明是這樣實現的，一種多肽抗原檢測豬旋毛蟲抗體的試劑盒，包括多肽抗原、包被液、多肽抗原包被的酶標板、抗體稀釋液、PBST洗滌液、陽性血清、陰性血清、封閉液、用辣根過氧化物酶標記的兔抗豬IgG二抗、底物顯色液TMB、終止液，所述多肽抗原為：TEp1，序列為：SWDEVFDEAHTKRKKGGGGSGGGGSFDEAHTKRKKFYPTPGGGGSGGGGTKRKKFYPTPHSSIKGQGQGQGFYPTPHSSIKIPMMT。

優選地，所述多肽抗原TEp1按照酶標板每孔1μg抗原包被。

優選地，所述包被液為pH＝9.6，濃度為0.05M的碳酸鹽緩沖液，所述碳酸鹽緩沖液由Na₂CO₃和NaHCO₃按質量比為16:29混合而成。

優選地，所述陽性血清為抗體稀釋液與旋毛蟲感染豬陽性血清按體積比1：100的比例稀釋而成。

優選地，所述陰性血清為抗體稀釋液與旋毛蟲陰性血清按體積比1：100的比例稀釋而成。

優選地，所述PBST洗滌液包括NaCl 8g/L，KCl 0.2g/L，Na₂HPO₄ 2.7g/L，KH₂PO₄0.2g/L，Tween-20體積分數0.05％，溶劑為蒸餾水，所述PBST洗滌液的pH值為7.4。

優選地，所述封閉液為含50g/L脫脂奶粉的TBST溶液。

優選地，所述用辣根過氧化物酶標記的兔抗豬IgG二抗是PBST溶液與兔抗豬二抗按體積比1：8000的比例稀釋而成。

優選地，所述終止液是濃度為2M的H₂SO₄。

本發明進一步提供了一種多肽抗原檢測豬旋毛蟲抗體的檢測方法，該方法利用上述多肽抗原檢測旋毛蟲抗體的試劑盒進行檢測，包括以下步驟：

(1)將TEp1用包被液稀釋后滴在酶標板上，4℃過夜包被；

(2)甩去包被液，用PBST洗滌液振蕩洗滌4次，每次洗滌5min；