[發明專利]具有自殺基因開關的靶向CD47的工程化免疫細胞

有效

• 申請號: 201711295475.8
• 申請日: 2017-12-08
• 公開（公告）號: CN109897114B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 曹衛;何佳平;劉麗萍;馬安云
• 申請（專利權）人: 亙喜生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 肖艷;徐迅

本發明提供了一種具有自殺基因開關的靶向CD47的工程化免疫細胞。具體地，本發明提供了一種靶向CD47的嵌合抗原受體T細胞，并且所述細胞的CAR結構中包含細胞自殺元件。本發明對CAR結構中的CD47 scFv的親和力作出了優化并選擇合適的CAR?T細胞輸注方式，從而使其對正常組織的毒性降低到人體可接受水平。同時在確保CD47 CAR?T細胞的活性的基礎上，添加細胞自殺元件，用于控制CAR?T細胞的活性和CRS等相關毒性，增強安全性。

技術領域

本發明涉及免疫治療領域，具體地涉及具有自殺基因開關的靶向CD47的工程化免疫細胞，更具體地涉及一種靶向CD47的嵌合抗原受體T細胞及其制備方法和應用。

背景技術

細胞免疫治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，是一種自身免疫抗癌的新型治療方法。它是運用生物技術和生物制劑對從病人體內采集的免疫細胞進行體外培養和擴增后回輸到病人體內的方法，來激發、增強機體自身免疫功能，從而達到治療腫瘤的目的。

嵌合免疫抗原受體(Chimeric antigen receptors，CARs)由胞外抗原識別區域，通常是scFv(single-chain variable fragment)，跨膜區以及胞內共刺激信號區域組成。CARs的胞外段可識別一個特異的抗原，隨后通過胞內結構域轉導該信號，引起T細胞的活化增殖、細胞溶解毒性和分泌細胞因子，進而清除靶細胞。CAR-T細胞治療在血液惡性腫瘤治療中取得了非常高的臨床反應率，這樣的高反應率是以往任何一種治療手段都無法達到的，在世界各引發了臨床研究的熱潮。但是在實體腫瘤治療中，研究人員發現在小鼠中注射meso-cart 能夠約束腫瘤的生長，但是不能治療腫瘤。這可能是由于腫瘤微環境中負調控因子的上調導致cart功能的減退，如在腫瘤微環境中，T細胞表面 PD-1(programmed deathprotein-1)表達上調限制了T細胞的功能。

B細胞淋巴瘤患者的外周血及生發中心樣B細胞中CD47的表達水平都明顯高于正常B細胞。同時，研究還發現不同病理組織學類型的非霍奇金淋巴瘤(NHL) 中CD47均有表達，如彌漫大B細胞性淋巴瘤(DLBCL)、濾泡細胞性淋巴瘤(FL)、邊緣區淋巴瘤(MZL)、套細胞性淋巴瘤(FCL)等。

CD47是治療腫瘤的一個潛在靶點，目前研究主要集中在使用靶向CD47的抗體來進行腫瘤治療，CD47抗體治療是通過DC細胞和CD8+T發揮腫瘤殺傷效應的。DC細胞通過CD47抗體和親吞噬分子協同作用，吞噬腫瘤細胞，并提呈腫瘤相關抗原給CD8+T，進而發揮CD8+T對腫瘤的特異性殺傷作用。

CD47作為細胞表面分子，在腫瘤細胞上高表達，因此可以設計靶向CD47的免疫嵌合受體T細胞(CAR-T)，對腫瘤進行治療。在CD47CAR設計過程中，需要平衡CAR對抗原的親和力，篩選出適當親和力，CAR對正常組織的殺傷毒性在人體可接受的水平。選擇合適的CAR-T細胞輸注方式對減弱CD47 CAR-T的毒性會有幫助。

與抗體治療相比，CAR-T細胞治療的優勢有：抗體的作用只是短暫的，停藥后抗體阻斷效果就會消失；有效抗體研發困難；抗體藥物昂貴；抗體阻斷CD47 信號后，腫瘤細胞被吞噬細胞識別殺死，在一些腫瘤負荷較高的病人中，沒有足夠的吞噬細胞對腫瘤細胞進行吞噬，達不到治療效果，而CAR-T細胞靶向腫瘤細胞表面CD47分子，被激活后直接對腫瘤細胞進行殺傷，不依賴于其他細胞。

目前，本領域還沒有成熟的靶向CD47的CAR-T細胞，本領域迫切需要開發靶向CD47的CAR-T細胞。

發明內容

本發明的目的在于提供具有自殺基因開關的靶向CD47的工程化免疫細胞，更具體地在于提供一種靶向CD47的嵌合抗原受體T細胞及其制備方法和應用。

本發明的另一目的在于對CD47 CAR-T的scFv親和力進行優化，并加入安全開關來控制CD47 CAR-T的毒性。