[發明專利]納米抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711295079.5
• 申請日: 2017-12-08
• 公開（公告）號: CN109897106B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 劉楚新;楊乃波;任艷;曹麗霞;丁權;黃謐;王媚娘;任哲;鄒婉婷
• 申請（專利權）人: 深圳華大生命科學研究院
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;A61K39/395;A61P17/00;A61P1/02
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明提出了一種納米抗體。該抗體：(1)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列；或(2)與(1)相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性。根據本發明實施例的納米抗體是特異性靶向離子通道TRPV3的抗體，能夠結合天然構象的TRPV3，并且所述納米抗體具有高水溶性、高耐性、高穩定性，高抗原結合性、低免疫原性、較強的組織穿透力以及高表達性。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，本發明涉及納米抗體及其制備方法和應用，更具體地，本發明涉及納米抗體、分離的核酸、核酸構建體、表達載體、宿主細胞、藥物組合物、納米抗體在制備藥物中的用途以及制備納米抗體的方法。

背景技術

活體細胞不停地進行新陳代謝活動，就必須不斷地與周圍環境進行物質交換，而細胞膜上的離子通道就是這種物質交換的重要途徑之一。離子通道是一類跨膜蛋白，負責離子在細胞內與細胞外之間的特異運輸。通過控制離子的流向，離子通道在興奮性組織中可快速調節各種細胞信號，在非興奮性組織中則緩慢地調節著細胞的增殖、體積、凋亡、遷移和粘附等過程。離子通道廣泛參與神經系統、心血管系統、免疫系統、內分泌系統中的多種活動。到目前為止，已發現超過55種因離子通道突變而導致的遺傳病，被稱為離子通道病(channelopathy)，累及心血管、神經、運動等多個系統。由于離子通道作用廣泛，因此它們成為許多相關疾病治療的靶點。據報道，離子通道靶點，主要包括配體門離子通道和電壓門離子通道，占所有藥物靶點的～14％，是繼GPCR之后的第二大類靶點，離子通道藥物在全球的銷售額達到120億美元以上。這些結果均表明，離子通道參與眾多的生命過程，與許多疾病相關，其靶點藥物的開發一直是研究的熱點，具有十分廣闊的應用價值。

離子通道往往結構復雜，由多個獨立的跨膜亞基組成。編碼離子通道的基因占人類基因組的～1.5％，并且呈現出高度的多樣性。結構的復雜性與多樣性，使得靶向藥物的開發具有很強的挑戰性。截止2015年，在預測的400多個離子通道中，只有少數幾個靶點的藥物被開發出來。目前，已上市或在研的離子通道藥物主要為小分子化學藥物和生物毒素等。然而，這些藥物具有選擇性較差的缺點，無法滿足臨床上的應用。相比較而言，抗體具有以下優勢：特異性強，能夠精準識別靶點，從而減少由于脫靶而產生的副作用；便于改造，通過蛋白工程的手段對抗體進行修飾，從而提高其親和力或者優化其藥代動力學特征。

抗體一直是人們用來研究蛋白質的重要工具，被廣泛應用于科學研究與疾病診斷。隨著技術的進步，抗體藥物的開發速度大幅增長。截至2013年2月，共有34個抗體藥物獲得美國FDA批準上市。并且，還有30個左右的抗體處于Ⅲ期臨床階段，或者等待審批，還有數百個抗體處于多種疾病的早期臨床試驗。根據EvaluatePharma的數據，2015年全球銷量排名前10位的藥物中，有6款是單抗或重組蛋白藥物，并且這些藥物的單品年銷售額都在65億美元以上，而且保持6％以上的增長速度。全球在售單抗藥物在生物藥中的占比超過30％，在研單抗藥物在生物藥中的占比是70％。2015年全球銷售總額達到916億美元，近10年年均復合增長率達到31.65％。因此可見，單克隆抗體藥物的需求依然巨大。

然而，針對離子通道靶點，迄今尚無成熟的抗體藥物問世。因此，開發和獲得針對離子通道靶點的抗體藥物是科學家拭待解決的關鍵問題。

發明內容

本申請是基于發明人對以下事實和問題的發現和認識作出的：

DNA免疫中，由于裸露的DNA在細胞之間不易傳遞，并且抗原呈遞細胞(APC)吸收抗原也存在一定的難度，因此DNA通常難以激活免疫系統，產生的免疫反應較弱，尤其是在大動物免疫中。鑒于DNA免疫反應弱的不足，高靈敏度的篩選方法在制備離子通道抗體中就顯的異常關鍵，而高通量DNA測序技術為從海量的抗體基因庫中快速發現功能抗體分子提供了可能。本發明將DNA免疫與高通量測序技術相互結合，充分發揮各自的獨特優勢，提供了一種新的靶向抗體開發方法，成功獲得了針對陽離子通道TRPV3的抗體。