[發(fā)明專利]一種制備提取高分子量透明質(zhì)酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711289765.1
• 申請日: 2017-12-03
• 公開（公告）號(hào): CN108410926B
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李學(xué)朋;張宗華;劉潔;崔國梁;李江雷;沈偉偉
• 申請（專利權(quán)）人: 新疆阜豐生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12P19/26
• 分類號(hào): C12P19/26;C08B37/08;C12R1/46
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本發(fā)明屬于透明質(zhì)酸制備技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種制備提取高分子量透明質(zhì)酸的方法，包括以下步驟：步驟1)菌株活化，步驟2)發(fā)酵培養(yǎng)，步驟3)醇沉，步驟4)第一次板框過濾，步驟5)第二次板框過濾，步驟6)第三次板框過濾。本發(fā)明方法工藝可得到2300?2600KDa的透明質(zhì)酸產(chǎn)品，純度高，技術(shù)簡便、高效，具有廣闊的市場前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于透明質(zhì)酸制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種制備提取高分子量透明質(zhì)酸的方法。

背景技術(shù)

透明質(zhì)酸(hyaluronic acid，HA)是普遍存在于脊椎動(dòng)物和某些細(xì)菌莢膜中的一種大分子粘多糖。由于透明質(zhì)酸具有高度可塑性和粘彈性，良好的生物相容性以及超強(qiáng)的滲透性和保水性，被廣泛應(yīng)用于藥物、醫(yī)學(xué)、食品和化妝品等領(lǐng)域。不同分子量的透明質(zhì)酸具有的生物活性優(yōu)勢不同，低分子透明質(zhì)酸對皮膚和口服來說，容易吸收，而高分子量透明質(zhì)酸保水性優(yōu)于低分子量透明質(zhì)酸，可用于眼科粘性手術(shù)、修復(fù)軟組織、治療關(guān)節(jié)病或作為藥物載體等，特別是在減少和預(yù)防外科手術(shù)后組織粘連中具有很高的應(yīng)用價(jià)值。

目前低分子量透明質(zhì)酸的制備方法較多，主要有物理、化學(xué)和酶等方法，由于高分子量透明質(zhì)酸較容易降解，提取過程又經(jīng)常需要酸堿環(huán)境，不利于保持透明質(zhì)酸分子量，所以關(guān)于高分子量透明質(zhì)酸的制備方法目前主要是直接發(fā)酵法。

申請人之前的專利技術(shù)CN105368912A采用兩菌株混合發(fā)酵，大大提高了發(fā)酵效率，但是該方法對培養(yǎng)條件要求較高，可能導(dǎo)致不能形成優(yōu)勢菌株，而且產(chǎn)生的透明質(zhì)酸包括小、中、大三種分子量的透明質(zhì)酸，不能形成純度較高的單一產(chǎn)品，降低了產(chǎn)品附加值。高分子透明質(zhì)酸的產(chǎn)生與發(fā)酵培養(yǎng)基類型、發(fā)酵條件以及菌株細(xì)胞通透性等條件的影響。如何制備和提取高分子透明質(zhì)酸是我們需要解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明提供了一種發(fā)酵法生產(chǎn)高分子量透明質(zhì)酸的方法。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

一種制備、提取高分子量透明質(zhì)酸的方法，包括以下步驟：步驟1)菌株活化，步驟2)發(fā)酵培養(yǎng)，步驟3)醇沉，步驟4)第一次板框過濾，步驟5)第二次板框過濾，步驟6)第三次板框過濾。

具體地，所述方法包括如下步驟：

步驟1)菌株活化：將獸疫鏈球菌取出，接種于活化培養(yǎng)基進(jìn)行活化；

步驟2)發(fā)酵培養(yǎng)：將活化好的菌種接種于發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),發(fā)酵培養(yǎng)6h后，往發(fā)酵罐中添加甘油，控制甘油的濃度為200-300mg/L；繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)8-10h，超聲處理，然后繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)2h，終止發(fā)酵，得到發(fā)酵液；發(fā)酵過程中，通過流加濃度為100g/L的蔗糖溶液將殘?zhí)菨舛瓤刂圃诓坏陀?0g/L；

步驟3)醇沉：將發(fā)酵液過濾去除菌體，得到上清液，向上清液中加入3倍體積的無水乙醇進(jìn)行沉淀90min，收集沉淀得到濕物料A；

步驟4)第一次板框過濾：往濕物料中加純水，加熱至55℃，溶解后，加入1-1.2‰重量份的中性活性炭和0.8-1％重量份的珍珠巖，并調(diào)節(jié)pH 6.8，100rpm攪拌3min，再添加8-10‰重量份的NaCl，100rpm攪拌3min，然后51℃保溫1h，進(jìn)行第一次板框過濾，收集濕物料B；

步驟5)第二次板框過濾：往濕物料B加入50℃純水再次溶解后，再添加1-1.2％重量份的硅藻土，利用氫氧化鈉調(diào)pH至10，進(jìn)行第二次板框過濾，收集濕物料C；

步驟6)第三次板框過濾：往濕物料C加入50℃純水再次溶解，調(diào)節(jié)pH至7.5，進(jìn)行第三次板框過濾；將所得濕物料D進(jìn)行離心烘干，得高分子量透明質(zhì)酸產(chǎn)品。

優(yōu)選地，

所述活化培養(yǎng)基的組分為：蔗糖70g/L、蛋白胨2.0g/L以及硫酸鎂1.5g/L。

優(yōu)選地，