[發(fā)明專利]針對轉(zhuǎn)基因大豆dsABS品系的特異性PCR檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711284008.5
• 申請日: 2017-12-07
• 公開（公告）號: CN107937587B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張秀春;吳坤鑫;武亞丹;張春微;劉志昕
• 申請（專利權(quán)）人: 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時(shí)立新

本發(fā)明屬于轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種針對轉(zhuǎn)基因大豆dsABS品系的檢測方法專利申請事宜。該方法須先設(shè)計(jì)引物Primer?F和Primer?R，然后包括提取待檢測大豆樣品的DNA、PCR擴(kuò)增、電泳檢測、判定等步驟。本申請針對轉(zhuǎn)基因大豆dsABS品系開發(fā)設(shè)計(jì)，只要待測樣品中含有不小于0.05%質(zhì)量比例的轉(zhuǎn)基因大豆dsABS品系時(shí)，均可檢出，表現(xiàn)出較高的靈敏性，總體而言，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠等優(yōu)點(diǎn)，可為轉(zhuǎn)基因大豆dsABS品系的種植監(jiān)測、品種檢測等奠定良好的方法學(xué)基礎(chǔ)，具有較好的實(shí)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于轉(zhuǎn)基因食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種針對轉(zhuǎn)基因大豆dsABS 品系的檢測方法專利申請事宜。

背景技術(shù)

在對進(jìn)行轉(zhuǎn)基因植物及其加工產(chǎn)品進(jìn)行成分定性檢測時(shí)，可根據(jù)其檢測的特異性分為篩選檢測方法、基因特異性檢測方法和品系特異性檢測方法等。其中品系特異性檢測是通過檢測插入載體與植物基因組的連接區(qū)序列實(shí)現(xiàn)的。由于每一個(gè)轉(zhuǎn)基因植物品系，都具有特異的外源插入載體與植物基因組的連接區(qū)序列，因此品系特異性具有更高的特異性和準(zhǔn)確性，最適合做轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測。

根據(jù)《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測》國家標(biāo)準(zhǔn)，品系特異性檢測方法中往往對特異性 PCR 反應(yīng)擴(kuò)增的產(chǎn)物有一定要求，即：長度 120~300bp 之間、擴(kuò)增條帶單一、并可用于多種儀器進(jìn)行結(jié)果顯示。只有符合這些要求，才能較好滿足檢測快速、準(zhǔn)確、特異的要求，才能更加方便應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品成分檢測。

就轉(zhuǎn)基因大豆dsABS 品系而言，該品系是由美國俄亥俄州立大學(xué)和中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)核技術(shù)研究所開發(fā)的大豆新品系。該品系以非轉(zhuǎn)基因大豆（Glycine max）栽培品種Throne為受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法導(dǎo)入同時(shí)含有苜蓿花葉病毒、菜豆莢斑點(diǎn)病毒和大豆花葉病毒復(fù)制酶基因保守序列的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，因此該品系具有極好的同時(shí)抗苜蓿花葉病毒、菜豆莢斑點(diǎn)病毒和大豆花葉病毒三種病毒的能力。該品系目前正在一定范圍內(nèi)用于進(jìn)一步的試驗(yàn)、推廣種植階段。但現(xiàn)有技術(shù)中尚未建立較好的針對該品系的檢測方法，而建立一種較好的針對轉(zhuǎn)基因大豆dsABS品系的特異性PCR檢測方法，對于今后有效的對該轉(zhuǎn)基因品系的推廣種植及監(jiān)控具有十分重要的技術(shù)意義和應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容

本申請主要目的在于提供一種針對轉(zhuǎn)基因大豆dsABS 品系的特異性 PCR 檢測方法，從而為對該品系的準(zhǔn)確和有效檢測奠定基礎(chǔ)。

本申請所提供的技術(shù)方案詳述如下。

一對用于轉(zhuǎn)基因大豆dsABS 品系檢測用PCR引物，該引物根據(jù)轉(zhuǎn)基因大豆dsABS的轉(zhuǎn)化載體3'端及側(cè)翼大豆序列 (所述側(cè)翼大豆序列如SEQ ID NO.1所示)設(shè)計(jì)而成，包括Primer-F和Primer-R，引物序列如SEQ ID NO.2~3所示，具體為：

Primer-F ：5'-GAGAGGCGGTTTGCGTATTGGCTA-3'，

Primer-R ：5'-ACACTGTTCGCTCGCACTTATCTACT-3'。

一種針對轉(zhuǎn)基因大豆dsABS 品系的特異性 PCR 檢測方法，具體包括如下步驟：

（1）提取待檢測大豆樣品的 DNA；具體例如采用：CTAB法、異硫氰酸胍法或鹽酸胍法等各種從植物材料中提取DNA的方法；

（2）利用上述所設(shè)計(jì)引物Primer-F和Primer-R，以步驟（1）中所提取DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

PCR擴(kuò)增時(shí)，25μL擴(kuò)增體系設(shè)計(jì)如下：

10×PCR緩沖液，2.5μL，

dNTPs混合溶液，2μL，

引物Primer-F，10 μmol/L、1.0μL；